Departamento de Patologia

Avaliação do efeito do meio condicionado proveniente de fibroblastos orais senescentes sobre a viabilidade e crescimento de células de carcinoma

2023-09-14T17:19:58Z

Avaliação do efeito do meio condicionado proveniente de fibroblastos orais senescentes sobre a viabilidade e crescimento de células de carcinoma Francisconi, Nicolle da Silva O carcinoma epidermoide de boca (CEB) permanece entre as lesões malignas com maior prevalência no Brasil e no mundo, representando mais de 90% das malignidades que acometem a cavidade oral. O desenvolvimento e progressão do CEB não deriva somente de alterações genéticas nas células do parênquima, mas também em modificações fenotípicas e metabólicas das células presentes no estroma, em especial, os fibroblastos. Estas células, quando associadas à lesão tumoral, podem apresentar características biológicas e fenotípicas que têm sido relacionadas a uma maior taxa de progressão e metástase da lesão. Além disso, fibroblastos também podem adquirir um fenótipo secretor associado a senescência, cujas características e perfil secretório de diversos fatores tanto intra como extracelulares tem sido apontado como mecanismos de promoção e disseminação de diversos tipos de cânceres. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi analisar os efeitos do meio condicionado proveniente de fibroblastos orais na viabilidade, proliferação e migração de células de CEB in vitro. Para isso, fibroblastos jovens foram cultivados até a confluência, em parte da cultura foi adicionado concentrações de peróxido de hidrogênio a 30% para indução da senescência. Após lavagem, meio DMEM sem soro foi adicionado a cultura e deixado por 24h para coleta dos meios condicionados. Foram considerados meios senescentes onde pelo menos 50% da cultura obtivesse marcação positiva para enzima β-galactosidase. Células de CEB (linhagem CAL27) foram cultivadas em placas de 96 e 48 cavidades e os meios condicionados experimentais de fibroblastos senescentes (MCFS), fibroblastos jovens (MCFJ) e meio DMEM sem soro (DSS) foram adicionados para compor os grupos de intervenção, onde o controle foi realizado com meio convencional suplementado com 10% de soro fetal bovino (DS). Para avaliação da viabilidade celular foi utilizado o método da coloração com Sulforrodamina B; para análise da migração celular o método do “Scratch” ou ranhura; e para confirmação da proliferação celular, utilizou-se a coloração fluorescente com CyQuant. Foi observado que os grupos MCFJ e MCFS apresentaram uma média de viabilidade celular superior no tempo de 24h quando comparado ao tempo de 48h (p<0,000). A migração celular no grupo DSS apresentou diferença estatística apenas entre os tempos 0h e 48h (p=0,002), assim como o grupo MCFJ (p=0,04), já o grupo com MCFS foi significativo nos tempos 24h (p=0,042) e 48h (p=0,018) quando comparados ao tempo 0h. Em relação a proliferação celular, houve diferença estatística entre o grupo controle quando comparado ao grupo com grupo DSS (p=0,027) e de MCFS (p=0,034). Dessa forma, apesar das limitações que protocolos in vitro apresentam, foi possível observar que os meios condicionados foram capazes de influenciar na viabilidade, migração e proliferação das células de carcinoma epidermoide de boca. Seminário de Iniciação Científica e Tecnológica. Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências da Saúde. Departamento de Patologia.

Avaliação da expressão de podoplanina no componente epitelial do carcinoma de boca

2023-09-09T21:08:00Z

Avaliação da expressão de podoplanina no componente epitelial do carcinoma de boca Pereira, Camilla Kammer A Podoplanina é uma glicoproteína transmembrana, que se encontra expressa em tecidos normais, como vasos linfáticos, mas também em tecidos neoplásicos. Assim, o estudo da podoplanina é importante pois, em neoplasias malignas de epitélio, a expressão dessa proteína tem sido associada ao processo de transição epitélio mesenquimal, o qual é fundamental no processo de invasão e metástase. O objetivo deste trabalho foi determinar o valor prognóstico da expressão de podoplanina (PDP) em carcinoma epidermóide de boca (CEB) e avaliar sua relação com as variáveis clínicas e patológicas. Para o estudo, foram analisados 171 casos confirmados de CEB que foram submetidos a exame histopatológico no Laboratório de Patologia Bucal da Universidade Federal de Santa Catarina, entre 2013 e 2018. Ao final, foram selecionados 39 casos, dos quais 25 eram ressecções cirúrgicas e 14 biópsias incisionais. Para a avaliação do padrão de expressão da proteína Podoplanina, as amostras foram classificadas em padrão 1 (expressão de membrana restrita à periferia das ilhas), padrão 2 (expressão de membrana e/ou citoplasma além da periferia das ilhas tumorais), e padrão 3 (expressão fraca e difusa em tecido epitelial desorganizado). Como resultados, observou-se que o padrão 3 relacionou-se, na amostra total, com tumores maiores que 4 cm, localização em língua e com estadiamento TNM 3/4. Nas amostras provenientes de ressecções, o padrão 3 foi mais prevalente em língua e em pacientes de 40-59 anos, enquanto que em pacientes com mais de 60 anos predominou-se o padrão 1. Nos casos provenientes de biópsias incisionais, o padrão 3 relacionou-se com o estadiamento TNM 3/4. Conclui-se que, apesar de não apresentar relação com os desfechos óbito, recorrência e metástase, a expressão fraca e difusa de PDP pode indicar um fenótipo tumoral mais agressivo, clinicamente associado a estágios avançados da doença (TNM 3/4), maior tamanho tumoral e localizações com tendência a um pior prognóstico, como a língua. Seminário de Iniciação Científica e Tecnológica- Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências da Saúde. Departamento de Patologia. Curso de Odontologia.

Análise Toxicológica de Urgência: validação analítica e aplicação de método cromatográfico de triagem de substâncias tóxicas em urina utilizando microextração em fase sólida dispersiva (d-SPE)

2023-09-06T13:48:24Z

Análise Toxicológica de Urgência: validação analítica e aplicação de método cromatográfico de triagem de substâncias tóxicas em urina utilizando microextração em fase sólida dispersiva (d-SPE) Galetti, Isabela Nucci A intoxicação é conhecida como a manifestação de sintomas em decorrência da exposição à agentes tóxicos, como os medicamentos, quando não utilizados de forma correta, e as drogas de abuso. Com o crescimento de casos, o Centro de Informações e Assistência Toxicológicas de Santa Catarina (CIATox/SC) relatou que os benzodiazepínicos e os antidepressivos tricíclicos, como a amitriptilina, estão listados entre os 10 principais medicamentos causadores de intoxicação. A cocaína aparece em segundo lugar na lista de drogas de abuso registradas pelo CIATox/SC, com 365 casos. Assim, a análise toxicológica de urgência é indispensável tanto para o diagnóstico laboratorial quanto para auxílio no prognóstico. O objetivo do presente projeto foi validar um método analítico para identificação de benzoilecgonina, cocaína e amitriptilina em amostras de urina proveniente de pacientes do CIATox/SC, por meio da microextração em fase solida dispersiva (d-SPE) e análise realizada por cromatografia liquida de alta eficiência acoplada a detector de arranjo de diodo (CLAE-DAD). No atual trabalho foi realizado a validação por meio do método qualitativo com o objetivo de garantir a confiabilidade do método, visando a ampliação dos exames laboratoriais ofertados pelo LPtox. Assim, utilizou-se de guias para montar um plano de validação, por meio da Guidance for the validation of analytical Methology and Calibration of Equipament used for Testing of Illicit Drugs in Seized Materials and Biological Speciments (UNODC) e a resolução da ANVISA (RDC N 27/ 2012 e RDC N 166/2017). Nesse sentido, os parâmetros avaliados foram: limite inferior de quantificação (LIQ), o qual se testou diferentes valores de concentração para obter o menor valor, obtendo um LIQ de 1300 ng/mL para benzoilecgonina e para cocaína e amitriptilina obteve-se 100 ng/mL. Avaliou-se também a linearidade do método por meio do estabelecimento de 5 valores de concentrações para cada analito, assim, a benzoilecgonina não apresentou uma curva analítica satisfatória, já que o R da equação ficou em torno de 0,80, ademais, a cocaína e amitriptilina apresentaram valor de R de 0,987 e 0,960. Outro parâmetro realizado foi a precisão em 2 diferentes dias, obtendo-se valores satisfatórios e dentro das especificações da resolução da ANVISA, com valores inferiores a 15% em três diferentes concentrações. O teste do efeito residual também compôs o atual projeto por meio da injeção de amostras contendo os analitos para posteriormente injetar uma amostra branco, o que demonstrou que o equipamento não possui resíduos das analises anteriores e que os resultados foram de fato verdadeiros. Já a seletividade foi realizada pela injeção de 6 amostras brancos diferentes que permitiu a observação de que o método é seletivo ao diferenciar o analito quando na presença de outros componentes possivelmente presentes na amostra. Por fim, testou-se a estabilidade a curto prazo que consistiu em preparar os padrões de interesse e realizar a microextração e análise no dia 0 e nova análise após 72 horas do preparo, o teste foi realizado na concentração que consiste o limite superior de quantificação (LSQ) e obteve-se resultados satisfatórios que demonstra estabilidade do método por meio do coeficiente de variação em relação ao dia zero, que resultou para cocaína e amitriptilina respectivamente de 13,3% e 15,1%. Com os parâmetros da validação devidamente testados, realizou-se a análise da aplicabilidade da técnica em 20 amostras provenientes de pacientes com suspeita de intoxicação atendidos pelo CIATox/SC, resultando na identificação dos analitos, inclusive com detecção em amostras cujo resultado no teste rápido de imunocromatografia havia sido não detectado. Assim, fica comprovada a confiabilidade do método para complementar a ofertar de exames pelo LPtox. Seminário de Iniciação Científica e Tecnológica.Universidade Federal de Santa Catarina.Centro de Ciências da Saúde.Departamento de Patologia.