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A micropropagação de plantas é uma estratégia, que se vem ao encontro das necessidades dessas duas espécies aqui apresentadas o Rosmarinus officinalis e Calibrachoa sellowiana ambas com potencial econômico a ser explorado. O Alecrim (R. officinalis) planta de origem do Mediterrâneo, possui características medicinais, podendo ser amplamente utilizado na indústria de cosméticos e medicamentos. A Petúnia (C. sellowiana) com seus atributos ornamentais, com valor de conservação e pioneira na recuperação de áreas degradadas e, por se tratar de uma espécie nativa dos campos sulinos, do Bioma Mata Atlântica tem um alto valor ecológico. Além disto, esta duas espécies possuem características para ser adotada como fonte de renda alternativa para agricultores. No presente trabalho segmentos nodais e apicais foram extraídos de plantas matrizes de Rosmarinus officinalis e de Calibrachoa sellowiana, foram utilizados em diferentes protocolos para a micropropagação através do cultivo em meio de cultura com diferentes tipos e concentrações de fitorreguladores, durante a indução, regeneração e alongamento de brotos. Para a introdução in vitro de Rosmarinus officinalis foram testados 11 tratamentos: 1) MSB isento de fitorreguladores; 2) ácido naftalenoacético - ANA (1 μM); 3) ANA (2 μM); 4) a combinados de ANA (1 μM) com Benzilaminopurina - BAP (1 μM); 5) ANA (1 μM) com BAP (4 μM); 6) ANA (2 μM) com BAP (1 μM); 7) ANA (2 μM) com BAP (2 μM); 8) ANA (2 μM) com BAP (4 μM); 9) BAP (1 μM); 10) BAP (2 μM) e; 11) BAP (4 μM). Para promover a proliferação e a regeneração múltiplas de brotos, os calos e as brotações, foram repicados em três diferentes meios de cultura: 1) ANA (2 μM) + BAP (4 μM); 2) MS + ANA (0,1 μM) + BAP (1 μM) e; 3) MS isento de fitorreguladores. Em R. officinalis observou-se que mais de 43,6% dos explantes apresentaram um tipo de contaminação e 30 % destes revelaram a presença de oxidação e a formação de calo e brotos foi de 56,4%, após 5 semanas de cultivo. A permanência de contaminações com bactérias endógenas evidencia a necessidade de uso de antibióticos no meio de cultivo. Além disto, a alta porcentagem de oxidação e necrose das culturas sugere o uso de antioxidantes durantes os subcultivos. Portanto uma das possíveis estratégias para a micropropagação do alecrim é pela via de organogênese direta, pela ocorrência de regeneração de brotos diretamente dos explantes e pela via indireta, com a indução de calo seguida da regeneração de brotos. Em C. sellowiana, a indução e estabelecimento in vitro das culturas foi conduzida em seis tratamentos, com a suplementação ao meio de cultura básico MSB com diferentes combinações de ácido naftalenoacético - ANA (0 e 0,1 μM) combinados com Benzilaminopurina - BAP (0; 0,5 e 1,0 μM). Regeneração e Multiplicação de Brotos. Brotações e culturas nodulares induzidas e estabelecidas in vitro, foram repicadas para promover a proliferação e a regeneração de brotações múltiplas, em dois diferentes meios de cultura básico MSB suplementado com a combinações dos fitorreguladores: 1) ANA (0,1 μM) e BAP (0,5 μM) e; 2) ANA (0,1 μM) e BAP (1,0 μM). Para a regeneração e o alongamento, os brotos foram repicados para frascos tipo conserva (340 ml) em meio de cultura MSB e isento de fitorreguladores. Brotações com 3-5 cm de altura foram retiradas das folhas para evitar a desidratação e imersa em solução de Ácido Indolilbutírico – AIB (50 ppm) para a indução de enraizamento e transferidas para a substratos para promover a aclimatização. O uso do meio de cultura MSB suplementado com ANA (0,1 μM) mais BAP (1,0 μM) promoveu a alta produção de brotos, e o surgimento de culturas do tipo nodular, que posteriormente regeneram em brotações múltiplas. As brotações e estas culturas do tipo nódulos induzidas e estabelecidas in vitro, quando subcultivadas com ANA (0,1 μM) mais BAP (1,0 μM) promoveram uma alta regeneração de brotos. Para a altura (cm) das plantas, as médias mais elevadas foram obtidas nos tratamentos contendo ANA (0,1 μM) e em MS sem a suplementação de fitorreguladores. Enquanto que, a suplementação ao MSB com ANA (0,1 μM) em combinação com BAP resultou em média maior e significativo número médio e micro brotos por explantes. Portanto, a estratégia para a micropropagação da C. sellowiana se caracteriza pelo modelo da organogênese via formação de nódulos como às culturas nodulares. |
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