Efetivação de bioensaio para avaliação da resistência a ferrugem da videira

Abstract

Causada pelo fungo fitopatogênico Phakopsora euvitis Ono, a ferrugem da videira é uma doença recente no Brasil. A expansão das regiões produtoras e as mudanças climáticas são fatores que podem torná-la uma doença de importância econômica. O melhoramento genético visando resistência a doenças representa uma importante estratégia para evitar prejuízos e reduzir o uso de produtos químicos. Uma das etapas dos programas de melhoramento genético consiste na seleção de indivíduos resistentes. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver e validar uma metodologia de avaliação (bioensaio) da interação entre ferrugem e videira, que seja consistente, reproduzível e viável, buscando diminuir o tempo e aumentar a precisão na identificação de fontes de resistência utilizando discos foliares. A multiplicação dos urediniósporos foi realizada em folhas das cultivares Niágara Rosada, Bordô e Cabernet Franc. Realizou-se a desinfestação com hipoclorito de sódio, seguida da tríplice lavagem das folhas com água destilada e autoclavada, que foram acondicionadas em placas de Petri contendo em seu interior ágar-água. Com uma agulha, os urediniósporos foram depositados sobre a face abaxial e com um pincel foram espalhados sobre a folha. As placas foram armazenadas em câmara BOD com fotoperíodo de 16 h, ficando as primeiras 24 h na ausência de luz e temperatura de 25ºC. Isolou-se apenas uma pústula da primeira multiplicação. Para a determinação da forma de inoculação, foram utilizados os cultivares Bordô e Niágara Rosada. Discos foliares com 12 mm de diâmetro foram recortados e acondicionados em placas de Petri e mantidos em BOD. O experimento consistiu em bifatorial (2x5) com cinco repetições, sendo folhas com e sem pilosidade (removida com fita crepe) x formas de inoculação da doença. As formas de inoculação foram: T1 borrifado água autoclavada e pincelado dos urediniósporos, T2 disco mergulhado na suspensão de esporos, T3 aspersão com um borrifador, T4 deposição de uma gota de 30 μl, removida após 24 horas e T5 testemunha. A concentração da suspensão foi de 105 esporos/mL. Para determinar a melhor concentração de esporos a ser depositada sobre as folhas, foram cortados discos de 14 mm do cultivar Bordô. O experimento consistiu em bifatorial (2x5) com e sem adição de Tween 20 e cinco formas de inoculação, sendo estas 5x104, 1x105, 1,5x105, 2x105 esporos/mL e a testemunha, com cinco repetições. Para ambos os experimentos quantificou-se o número de pústulas diariamente, no 10º dia foi avaliado número total de pústulas, diâmetro das pústulas e o número de urediniósporos. A análise estatística foi realizada no programa ASSISTAT. O método de inoculação mais eficiente foi o da deposição da gota sobre os discos, onde a remoção da pilosidade não influenciou na sua ocorrência e a concentração da suspensão de esporos foi igual 1x105. Para a validação do bioensaio estudos mais detalhados devem ser realizados para compreender melhor sua ocorrência, a fim de torná-lo mais confiável, efetivo e reproduzível.

Caused by the phytopathogenic fungi Phakopsoraeuvittis Ono, the grapevine rust is a recent disease in Brazil. The expansion of productive regions and weather changes are factors that can turn it as an economical important disease. Plant breeding looking for disease resistance represents one important strategy to avoid economical losses and reduce the use of chemical products. One step of plant breeding programs consists on select resistant individuals. The currently work had the objective of develop and validate on evaluation methodology (bioassay) between the interaction of rust and grapevines, that is consistent, reproducible and viable, looking to decrease the time and increase the accuracy to identify the resistance sources using foliar discs. For the uredospore multiplication process, we utilized foliar discs from Pink Niagara, Bordeaux and Cabernet Franc varieties. The triple wash of the leaves were made, those were packed in Petri dishes with agar-water medium. With the help of one needle, the urediniospores were deposited on the down face of the leaf, and with one brush, they were spread on the leaf surface. The Petri dishes were stored in BOD chamber with 16-hour photoperiod, staying the first 24 hours without light, and temperature of 25ºC. After we isolated only one pustule of the first multiplication. To determine the inoculation way, we utilized the Bordeaux and Pink Niagara cultivars. Foliar discs within 14 mm diameter, cut off, packed in Petri dishes, and stored in BOD chamber. The experiment was bi-factorial (2x5) with five repetitions, leaf with hairiness and without hairiness (removed with tape) versus different ways of pathogen inoculation. The inoculation ways were: T1 sprayed autoclaved water and brushed urediniospores, T2 disc dipped in spore solution, T3 sprayed with a spray bottle, T4 deposited in one 30μl drop, removed after 24 hours and T5 witness. The spore concentration in the solution was 105 spores/mL. To determine the best spore concentration to deposit on the leaves, we used cut discs from Bordeaux cultivar. The experiment consisted in bi-factorial (2x5) with or without Tween 20, and five different spore concentration, 5x104, 1x105, 1,5x105, 2x105 spores/mL and the witness, with five repetitions. For both experiments, the number of pustules were quantified daily, in the 10th day evaluated the total number of pustules, pustules diameter, and urediniospores number. To the statistical analysis, we used the program ASSISTAT. The most efficient inoculation method was the drop on the discs, where the removal of hairiness did not show any influence in the occurrence; and the best spore concentration was 1x105. To the validation of the bioassay, studies with more details might be necessary for better occurrence comprehension, to turn it more accurate, effective, and reproducible.