Investigação do poliformismo de genes de grupos sanguíneos em doadores voluntários de sangue e em pacientes com hemopatias no estado de Santa Catarina

Abstract

De acordo com a Nomenclatura da Sociedade Internacional de Transfusão Sanguínea (ISBT), já foram descritos mais de 340 antígenos eritrocitários, distribuídos em 36 sistemas de grupos, coleções e séries. Esses antígenos são codificados por genes altamente polimórficos e a distribuição de alelos varia entre diferentes populações e grupos étnicos. Portanto, o conhecimento e a detecção dos antígenos eritrocitários são essenciais na prática transfusional, pois o desenvolvimento de anticorpos contra esses antígenos pode se tornar um grande problema clínico, principalmente nos casos onde os pacientes são portadores de hemopatias ou em outras doenças que requerem transfusões sanguíneas periódicas. Os métodos moleculares para a identificação dos antígenos de grupos sanguíneos já são aplicados em alguns países e inclusive já existem protocolos de genotipagem de antígenos eritrocitários bem estabelecidos e validados na população brasileira contudo, devido à grande diversidade étnica presente em nosso país, ainda há necessidade de se identificar os polimorfismos dos grupos sanguíneos nas diferentes regiões brasileiras, como, por exemplo, na população do Estado de Santa Catarina, onde não foi publicado nenhum estudo até o presente momento com esse tema. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar o polimorfismo de genes de grupos sanguíneos em doadores voluntários de sangue e em pacientes com hemopatias politransfundidos no Estado de Santa Catarina. Para avaliar os polimorfismos dos sistemas de grupos sanguíneos Rh, Kell, Duffy, Kidd e Diego em doadores de sangue e pacientes portadores de hemopatias do estado de Santa Catarina foram genotipadas amostras de 373 doadores de sangue de sete regiões do estado que compõem a hemorrede de hemoterapia no estado de Santa Catarina e 31 amostras de pacientes que necessitam de transfusão encaminhadas ao Laboratório de Oncologia Experimental e Hemopatias (LOEH) entre agosto de 2011 e março de 2014. Para a identificação do gene RHD e alelos RHCE*C/c, RHCE*E/e, KEL*01.1/KEL*02, FY*01/FY*02, FY*02N.01 (mutação GATA), JK*01/JK*02 e DI*01/DI*02 foi utilizada a técnica de PCR Multiplex e a reação em cadeia da polimerase seguida da digestão enzimática com enzimas de restrição (PCR-RFLP, do inglês Restriction Fragment Length Polymorphism), respectivamente. Posteriormente para a identificação do alelo SMIM1*64_80del responsável em homozigose pelo fenótipo Vel- foi utilizada a técnica de PCR em Tempo real aplicada somente na análise de amostras de doadores voluntários de sangue. Na análise dos resultados, foi observada que os genótipos RHCE*Ee, KEL*01.1/KEL*02, FY*01/FY*01, JK*01/JK*01, JK*02/02 foram os mais frequentemente encontrados no estado de Santa Catarina. As frequências genotípicas obtidas neste estudo foram comparadas com diversas populações brasileiras e com populações europeias de outros estudos e diferenças significativas foram encontradas, inclusive entre as populações das diferentes regiões do estado de Santa Catarina o que mostra que, mesmo no interior do estado, há uma população heterogênea. As frequências desse estudo foram similares a de populações caucasianas, italianas e alemãs para os sistemas Kell e Kidd. Os dados obtidos neste trabalho, além de permitir conhecer a população estudada, também possibilitarão criar um banco de dados com os resultados da genotipagem obtidos em doadores, com a finalidade de se melhorar a compatibilidade transfusional para os pacientes que necessitam de transfusão sanguínea.<br>

Abstract : According to the nomenclature of the International Society of Blood Transfusion (ISBT), there are more than 340 red cell antigens described in 36 groups of systems, collections and series. Polymorphisms of the blood group systems are highly polymorphic and distribution of alleles varies between different populations and ethnic groups. Therefore, knowledge and detection of red cell antigens are essential in transfusion practice, due to the fact that the development of antibodies against these antigens can become a major clinical problem, especially in cases where patients have blood disorders or other diseases that require periodic blood transfusions. Molecular methods for the identification of blood group antigens are already applied in some countries and there are, in fact, red cell antigens genotyping protocols well established and validated in the Brazilian population. Nevertheless, due to the great miscegenation present in our country, there is still a need to identify polymorphisms of blood group systems in different regions of Brazil; for example, the population of the State of Santa Catarina, which has no study published with the subject up to now. The objective of this study was to investigate the polymorphism of genes of blood group systems in voluntary blood donors and patients with hematological multiple transfusions in the State of Santa Catarina. To evaluate the polymorphisms of blood group systems Rh, Kell, Duffy, Kidd and Diego in blood donors and patients with hematological State of Santa Catarina, were genotyped samples from 373 blood donors from seven regions of the state that make up the Hemotherapy Service Net in the state of Santa Catarina and 31 transfusion-dependent patients forwarded to Experimental Oncology and Hematology Laboratory (LOEH) between August 2011 and March 2014. To identify RHD gen and RHCE*C/c alleles and RHCE*E/e, KEL*01.1/KEL*02, FY*01/FY*02, FY*02N.01 (GATA mutation), JK*01/JK*02 and DI*01/DI*02 was used the technique Multiplex PCR and polymerase chain reaction followed by enzymatic digestion with restriction enzymes (PCR-RFLP, the restriction Fragment Length Polymorphism), respectively. Posteriorly, to the identification of SMIM1*64_80 del allele responsible in homozygous for Vel- phenotype, was used the PCR technique in real time only applied to the analysis of samples of voluntary blood donors. In analyzing the results, it was observed that the RHCE*Ee, KEL*01/KEL*02, FY*01/FY*01, JK*01/JK*01 e JK*02/JK*02 genotypes were the most frequently found in the state of Santa Catarina. The genotypic frequencies obtained in this study were compared with several Brazilian populations and European populations of other studies and significant differences were found even among the populations of the different regions of the state of Santa Catarina, which shows that even inside the state, there is a heterogeneous population. The genotype frequencies were similar to those in Caucasian samples and from Naples-Italy and Zurich-Germany, studied in other groups for the Kell and Kidd Systems. The data obtained in this work, besides allowing to know the studied population also enables to create a database with the genotyping results obtained from donors, in order to improve a secure transfusion compatibility for patients who require blood transfusion.