HF-DLLME: uma nova combinação das técnicas de microextração líquido-líquido dispersiva e microextração em fase líquida com membrana microporosa para determinação de aflatoxinas e agrotóxicos em sucos

Abstract

Neste trabalho foi proposto, pela primeira vez, a combinação simultânea das técnicas de microextração em fase líquida suportada em fibra oca (HF-LPME) e microextração líquido-líquido dispersiva (DLLME) para aplicação em amostras líquidas. Dois estudos foram desenvolvidos utilizando a metodologia proposta, a qual foi denominada de DLLME suportada com membrana oca (HF-DLLME). O primeiro estudo foi à determinação de aflatoxinas (AFB1, AFB2, AFG1 e AFG2) em suco de soja por HPLC-FLD. A principal vantagem desta abordagem foi o uso de pequenas quantidades de solventes orgânicos e a não utilização de solventes clorados. As condições ótimas de extração foram: 1-octanol imobilizado nos poros da fibra oca de polipropileno; tolueno e acetona na proporção 1:5 como solventes extrator e dispersor, respectivamente, volume total da mistura de solventes extrator:dispersor igual a 100 µL, adição de NaCl a 2% do volume da amostra e tempo de extração 60 min. As condições ideais para a dessorção líquida foram de 150 µL de acetonitrila:água (50:50 v/v) e tempo de dessorção de 20 min em banho de ultrassom. A faixa linear variou entre 0,03-21 µg L-1, com coeficientes de correlação R2 variando 0,9940-0,9995. . Os limites de detecção e quantificação variaram entre 0,03-0,27 µg L-1 e 0,1-0,9 µg L-1, respectivamente. As recuperações dos analitos variaram entre 72-117% e precisão entre 12 e 18%. O segundo estudo foi a determinação direta de 3 agrotóxicos (parationa metílica, difenoconazol e clorpirifós) em suco de uva e detecção e quantificação por cromatografia líquida acoplada com detector por arranjo de diodos. A condição ideal de extração foi alcançada através do preenchimento dos poros da parede da membrana com dodecanol e usando hexano/acetona como solventes de extração/dispersão. A adição de sal na amostra teve um efeito negativo sobre a eficiência da extração dos analitos e o tempo de extração ótimo foi de 60 min. O volume de hexano/acetona e o pH da amostra foram fatores estudados que não afetaram significativamente o sinal analítico dos compostos nos níveis estudados. Por conseguinte, uma quantidade intermediária destes solventes (250 µL; 1:7,5 v/v) e pH 6 foram selecionados como condições ótimas de extração. A condição ideal de dessorção foi obtida com acetonitrila como solvente e 10 minutos de tempo de dessorção em banho de ultrassom. A faixa linear de trabalho variou entre 58 a 500 µg L-1 (parationa metílica), 62-500 µg L-1 (difenoconazol) e 107-500 µg L-1 (clorpirifós), com coeficientes de correlação que variam 0,9980-0,9942. Os limites de detecção e de quantificação encontrados foram, respectivamente, 17 e 58 µg L-1 paraparationa metílica, 19 e 62 µg L-1 para difenoconazol e 32 e 107 µg L-1 para o clorpirifós. A precisão inter ensaios apresentou valores de desvio padrão relativo entre 3,5 e 11,2%. De acordo com os resultados, a nova combinação das técnicas de HF e DLLME mostrou-se como um procedimento eficiente para a extração de micotoxinas e agrotóxicos em sucos de soja e de uva, respectivamente. A HF-DLLME, comparada com as técnicas tradicionais de preparo de amostra, apresenta-se como uma excelente alternativa para determinação de micotoxinas e agrotóxicos devido a algumas características, tais como: baixo consumo de solvente orgânico, não uso de solventes clorados, não necessidade de centrifugação, baixo custo e fácil aplicação. Apesar de a HF-DLLME apresentar tempo de análise longo (70-90 min.) ela permite a extração simultânea de amostras, aumentando a frequência analítica da técnica. Além disso, esta nova técnica tem um grande potencial para uso em sistemas automatizados como Well Blade 96 o que acarretaria menor tempo de análise para uma amostra (1-2 min.).<br>

Abstract : This work was proposed for the first time, developing a sample preparation method based on simultaneous combination of techniques between hollow-fiber-supported liquid membrane (HF-LPME) and dispersive liquid-liquid microextraction (DLLME) for direct application in liquid matrices. Two studies were developed, first to determination of aflatoxins (AFB1, AFB2, AFG1 and AFG2) in soybean juice by HPLC-FLD. The main advantage of this approach is the use of non-chlorinated solvent and small amounts of organic solvents. The optimum extraction conditions were 1-octanol as immobilized solvent; toluene and acetone at 1:5 ratio as extraction and disperser solvents (100 µL), NaCl at 2% of the sample volume and extraction time of 60 min. The optimal condition for the liquid desorption was 150 µL acetonitrile:water (50:50 v/v) and desorption time of 20 min. The linear range varied from 0.03 to 21 µg L-1, with R2 coefficients ranging from 0.9940 to 0.9995. The limits of detection and quantification ranged from 0.01 µg L-1 to 0.03 µg L-1 and from 0.03 µg L-1 to 0.1 µg L-1, respectively. Recovery tests ranged from 72 to 117% and accuracy between 12 and 18%. The second study was determination of 3 pesticides directly in grape juice, using HF-DLLME method and detection and quantification were performed by liquid chromatography with diode array detection. The optimum extraction condition was reached by filling the pores of the membrane wall with dodecanol and using hexane/acetone as extraction/dispersion solvents. Salt addition had a highly negative effect on the extraction efficiency and the optimum extraction time was 60 min. The volume of hexane/acetone mixture and the sample pH did not affect the signal at the levels studied. Therefore, an intermediate amount of these solvents (250 µL; 1:7.5 v/v) and pH 6 were selected. The optimum desorption condition was obtained with acetonitrile and 10 min of desorption time. The linear working range varied from 58 to 500 µg L-1 (parathion-methyl), 62?500 µg L-1 (difenoconazole) and 107?500 µg L-1 (chlorpyrifos), with correlation coefficients ranging from 0.9980?0.9942. The limits of detection and quantification found were, respectively, 17 and 58 µg L-1for parathion-methyl, 19 and 62 µg L-1for difenoconazole and 32 and 107 µg L-1for chlorpyrifos. The relative standard deviation ranged between 3.5 and 11.2%. According to results, the new combination of HF and DLLME procedure presented efficient data for extraction of mycotoxins and pesticides in soybean and fruit juices, respectively. The HF-DLLME is an excellent alternative due to some characteristics such as low organic solvent consumption, no use ofchlorinate solvents, centrifugation is not required, low cost and easy application. Furthermore, this new technique has great potential for use in automated systems.