Cocaína e cocaetileno em mortes violentas: levantamento da ocorrência e validação de metodologia para a identificação em humor vítreo com SPME por CG/EM

Abstract

A utilização intencional de substâncias modificadoras do estado de consciência é prática milenar entre as civilizações. O consumo abusivo na sociedade contemporânea cresce vertiginosamente, disseminado por todas as esferas sociais, fomentando um rentável e disputado mercado ilegal. A íntima relação do uso de drogas e mortes violentas é tema amplamente debatido em levantamentos e estudos científicos. O conhecimento do perfil destes óbitos e as substâncias mais recorrentes alicerçam o desenvolvimento técnico-científico para atender às especificidades desta demanda. O Instituto Geral de Perícias de Joinville (IGP/Joinville) conta com software institucional que armazena dados relacionados aos atendimentos e os respectivos laudos das ocorrências, viabilizando levantamentos desta natureza. No âmbito forense a realização de exames toxicológicos é importante ferramenta para auxiliar na determinação da causa morte. Todavia, o estado do cadáver pode ser fator limitante para a coleta de espécimes de referência. O humor vítreo (HV) figura como matriz alternativa de grande aplicabilidade por apresentar boa correlação com os níveis sanguíneos. A microextração em fase sólida (SPME) destaca-se pela alta sensibilidade, fácil execução, viabiliza a análise de pequenos volumes e integração automatizada ao cromatógrafo gasoso com espectrômetro de massas (GC/MS). O presente estudo efetuou levantamento do perfil de óbitos atendidos pelo IGP/Joinville no período de 2013 a 2015, ponderando a natureza jurídica das mortes distribuídas em homicídios, suicídios, acidentes de trânsito e outras formas, o gênero e a idade das vítimas, a coleta de amostras biológicas e as substâncias mais detectadas. Os acidentes de trânsito compreenderam o maior número de óbitos, abrangendo 40,9% dos casos, seguidos por homicídios com 29%, enquanto os suicídios contabilizaram 9,1% e outras formas de morte 21%. Entre as amostras não coletadas as justificativas se alternaram entre óbitos em ambiente hospitalar (54,1%), cadáveres putrefeitos (7,7%), carbonizados (0,6%), politraumatizados (1,3%), ossadas (0,9%) e não justificados (35,4%). Os homicídios abarcaram o maior percentual de toxicológicos detectados (70,5%). Os suicídios apresentaram detecção em 51,6%, acidentes de trânsito em 50% e outras formas de morte em 51,9% dos casos. A cocaína (COC) foi a substância ilícita mais recorrente entre as classificações de morte com exposição concomitante ao álcool. A exposição associada leva a formação do cocaetileno (CE), composto mais tóxico que os precursores. Diante deste cenário, foi validado método para a detecção de COC e CE em HV por SPME e GC/MS. A técnica compreendeu a análise de 0,5 mL de HV, adicionados de 1,0 mL de tampão borato, extração por SPME (fibra DVB/PDMS) sob temperatura (60ºC) e agitação constantes durante 20 min., exposição da fibra no injetor a 250ºC por 5 min e limpeza a 250ºC por 5 min. O método demonstrou precisão sob repetibilidade, apresentando coeficientes de variação (CVs) dos tempos de retenção de 0,4% e 0,3% para COC e CE respectivamente, limite de detecção estipulado em 5 ng/mL com CVs de triplicatas inferiores a 20%, ausência de interferentes na detecção dos analitos de interesse, considerando-se os compostos nicotina, lidocaína e cafeína, e procedimento de limpeza eficaz para a eliminação do efeito carryover. A aplicação do método em amostras post mortem de HV reproduziu os resultados de detecção obtidos em sangue e urina, assim como confirmou a não detecção dos analitos nos casos negativos testados. Os achados demonstraram a viabilidade de emprego do HV na ausência das matrizes de referência e a importância da coleta de matrizes diversificadas visando ampliar a janela de detecção dos analitos de interesse.<br>

Abstract : The intentional use of substances that modify the state of consciousness has been happening for thousands of years among civilizations. The abusive use in the contemporary society has grown wildly, is has been spread by all social spheres, fostering a profitable and disputed illegal market. The close relation between the use of drugs and violent deaths is an issue widely discussed in surveys and scientific researches. The knowledge about the profile of these deaths and the most recurrent substances, anchors the scientific development to meet the needs of these demands. The Instituto Geral de Perícias de Joinville (IGP/Joinville) has institutional software that store data related to the attendance and respective occurrence reports, making surveys of this kind feasible. In the forensic scope, the procedure of toxic exams is a very important tool to determine the cause of death. Nevertheless, the state of the corpse may be a limiting factor when it comes to collecting reference specimen. The vitreous humor (VH) features as alternative matrix of big applicability for showing good correlation with blood levels. The extraction by solid phase microextraction (SPME) stands out for high sensibility, easiness to use, making feasible the analysis of small volumes and automated integration to gas chromatography-mass spectrometry (GC/MS). The presented study has carried out a survey about the profile of deaths assisted by IGP/Joinville between the years 2013 and 2015, considering the legal status of the deaths among homicide, suicides, traffic accidents and others, gender, victims age, collection of biological samples and the most detected substances. Traffic accidents make the highest number of deaths, comprehending 40,9% of occurrences, followed by homicides with 29%, other forms of deaths with 21% and suicides with 9,1%. Among the cases not collected the reasons are deaths in hospitals (54,1%), putrefied corpses (7,7%), burned corpses (0,6%), multiple-injured bodies (1,3%), bones (0,9%) and non justifies (35,4%). The homicides comprised the biggest percentage of positive toxicological (70,5%) followed by others (51,9%), suicides (51,6%) and traffic accidents (50%). The cocaine (COC) was the most detected compound in all deaths classification with concomitantly consumption of alcohol. They lead to formation of cocaethylene (CE), compound that is more toxic than the former ones. In this situation, the method for detection of COC and CE was validated in VH by SPME and GC/MS. The technique includes the addiction of 0,5 mL of VH and 1,0 mL of borax buffer, exposed to SPME (DVB/PDMS fiber) for 20 min at 60ºC and constant agitation. After the fiber was exposed in the inlet (250ºC) for 5 min and then cleaned for 5 min at 250ºC. The method has shown precision on repeatability with coefficient of variation (CVs) of retention time by 0,4% (COC) and 0,3% (CE), limit of detection estimated in 5 ng/mL with CVs of triplicates lower than 20%, absence of interfering compounds in the detection of analytes of interest, considering the compounds nicotine, lidocaine and caffeine, and procedures of effective cleaning in order to eliminate the carryover effect. The application of this method in post mortem samples of VH has shown correlation with the positive results obtained by COC and CE in blood and urine, as well as it has confirmed the non-detection of analytes in tested negatives. The findings have shown the importance of varied matrix collection in order to enlarge the window of detection and the feasibility of the use of VH in the absence of reference matrixes.