Aplicação de membrana oca em um sistema de 96-Well plate para determinação de desreguladores endócrinos em água por HPLC

Abstract

O objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de um método para determinação de seis desreguladores endócrinos (4-nonilfenol, 4-octilfenol, 4-terc-octilfenol, metilparabeno, etilparabeno e bisfenol A) empregando-se um sistema de 96-Well plate associado com a microextração por membrana líquida renovável usando membrana oca e cromatografia líquida de alta eficiência. O sistema de 96-Well plate permite que o analista realize até 96 extrações simultâneas, o que contribui em muito para uma melhor frequência analítica. Poços de amostragem foram utilizados para a realização da extração e dessorção. Neste estudo, o volume total de amostra em cada poço foi de 1,5 mL enquanto o volume de solvente de dessorção foi de 300 µL. O método proposto mostrou-se muito vantajoso, pois alcançou valores satisfatórios de detecção bem como também ganho de tempo nas análises. Além disso, pode-se citar uma eficiente limpeza da amostra e adequação do método ao instrumento analítico. Primeiramente foi estudada a relevância dos procedimentos com a membrana oca porosa, tais como o uso ou não de recobrimento na membrana, e a utilização ou não de solventes extrator e dispersor na amostra. A melhor condição encontrada foi o uso de recobrimento na membrana e o emprego de solvente extrator junto a amostra. Logo após, foram otimizadas as condições de dessorção. O tempo de dessorção foi avaliado na faixa de 10 a 30 min, sendo que a condição ótima foi de 10 min. O solvente de dessorção também foi estudado e o que obteve uma maior reposta foi a utilização de 75% de acetonitrila e 25% de água. O melhor solvente de recobrimento da membrana foi a mistura de 50% de 1-octanol e 50% de hexano. Dentre os solventes extratores avaliados, o hexano apresentou um melhor resultado. A faixa de pH estudada variou de 4 a 6, sendo 5 o pH ótimo para a extração. Por fim, foi realizado um planejamento de composto central para analisar o efeito da força iônica (adição de sal), volume de solvente extrator e tempo de extração sobre a eficiência de extração. As condições ótimas foram a não adição de sal (NaCl), 15 µL de solvente extrator e o emprego de 45 min de extração. A partir dos resultados obtidos foram realizadas curvas de calibração para a obtenção dos parâmetros analíticos de mérito. Os limites de quantificação variaram de 0,5 a 15 µg L-1. A HFRLM combinada com o sistema de 96-Well plate foi aplicada em amostra de água e foram obtidas recuperações entre 72 e 130% com RSD variando de 1 a 14,3%. Deste modo, a técnica mostrou boa sensibilidade e aplicabilidade para a determinação de parabenos, bisfenol A e alquilfenóis em amostras aquosas.<br>

Abstract : The present work aims to determine six endocrine disruptors (4-nonylphenol, 4-octylphenol, 4-terc-octylphenol, methylparaben, ethylparaben and bisphenol A) employing the 96-Well plate system associated with hollow fiber renewal liquid membrane and high-performance liquid chromatography. The 96-Well plate allows to the analyst to perform up to 96 simultaneous extractions, which increases considerably the analytical frequency. Sampling wells were used to perform the extraction and desorption. In this study, the total volume in each well was 1.5 mL while the volume of desorption solvent was 300 µL. The proposed method exhibited very advantageous for the reason that good analytical performance was achieved and analysis time was saved. Furthermore, an efficient clean-up of the sample and suitability of the method to the analytical instrument can be mentioned. Firstly, it was studied the relevance of the techniques, such as the use of recoating on the membrane and the use of extractor and disperser solvents. The best conditions achieved were the use of recoating on the membrane and the use of extractor solvent. After that, liquid desorption conditions were optimized, being the time between 10 and 30 min evaluated and the time of 10 min was chosen. The desorption solvent was also studied and it was obtained a greater response using 75% of acetonitrile and 25% of water. The best recoating solvent on the membrane was a mixture of 50% of 1-octanol and 50% hexane. Among the extractor solvents evaluated the hexane showed the best result. The pH of the sample was also investigated in the range of 4 to 6, being 5 the optimal pH. Finally, it was made a central compound planning to study the ionic strength, extractor solvent volume and extraction time. The optimal conditions were not adding salt, 15 µL of extractor solvent and 45 min of extraction. From these results it was prepared calibration curves to each analyte to obtain the statistical parameters and analytical figures of merit. The limit of quantification varied from 0.5 to 15 µg L-1. The HFRLM combined with the 96-Well plate was applied in water samples and recuperation from 72 to 130% were achieved with errors between 1 to 14,3%. Thus, this technique shows good sensibility and applicability to determination of parabens, bisphenol A and alkylphenols in aqueous samples.