Caracterização de Acanthamoeba spp. e microrganismos resistentes às amebas obtidos de aparelhos de ar condicionado de ambientes de um hospital público de Florianópolis, SC

Abstract

Espécies de Acanthamoeba estão entre as amebas de vida livre mais prevalentes no ambiente. Seu estudo tem importância médica e ambiental, pois além de Acanthamoeba spp. apresentarem a capacidade de causar infecções graves, elas também têm a habilidade de abrigar microrganismos em seu interior. Essa característica é relevante, visto que microrganismos potencialmente patogênicos podem estar presentes no interior amebiano, recebendo proteção da ação de agentes externos. Neste contexto, o presente estudo teve como objetivo caracterizar Acanthamoeba spp. isoladas de amostras de poeira de aparelhos de ar-condicionado de um hospital público de Florianópolis, Santa Catarina, Brasil, bem como investigar microrganismos resistentes às amebas (MRAs) nos isolados de Acanthamoeba spp. Foram incluídos neste estudo, 39 isolados de diferentes ambientes hospitalares. A extração do DNA total dos isolados de Acanthamoeba spp. foi realizada a partir das culturas axênicas. O DNA amebiano foi submetido à reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando iniciadores gênero-específico e o fragmento obtido foi sequenciado para determinação dos genótipos. A determinação do potencial patogênico dos isolados foi feita através de ensaios de osmotolerância e termotolerância. Iniciadores específicos foram utilizados para PCR, visando avaliar a presença de Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas spp., Staphylococcus aureus e Legionella spp. como MRAs. Todos os isolados caracterizados previamente por morfologia como pertencentes ao gênero Acanthamoeba foram confirmados através da técnica de PCR, com a amplificação de um fragmento de aproximadamente 500 pb. A análise das sequências obtidas permitiu classificar os isolados em três genótipos: T4, T5 e T11. Além disso, 7 (18%) dos isolados foram classificados como patogênicos em testes fenotípicos, 27 (69,2%) com patogenicidade intermediária e 5 (12,8%) como não-patogênicos. O estudo de MRAs revelou a presença de Klebsiella pneumoniae em 5 (12,8%) isolados amebianos, Pseudomonas spp. em todos os isolados amebianos, Legionella spp. em 26 (66,7%) isolados amebianos e Staphylococcus aureus em 7 (18%) dos 39 isolados amebianos. Considerando que todos os isolados amebianos apresentaram MRAs de importância em infecções relacionadas à assistência à saúde, os dados corroboram para o estudo de Acanthamoeba como um importante biomarcador da qualidade do ar em ambientes hospitalares. Os resultados obtidos no presente estudo merecem atenção, pois as amebas presentes nos aparelhos de ar condicionado podem estar servindo como possíveis fontes de infecções em ambiente hospitalar.

Abstract : Acanthamoeba species are among the most prevalent free-living amoebae in the environment. Its study has medical and environmental importance, because besides Acanthamoeba spp. present the ability to cause serious infections, they also have the ability to harbor microorganisms within them. This feature is relevant, since potentially pathogenic microorganisms may be present in the amoebic interior, receiving protection from the action of external agents. In this context, the present study aimed to characterize Acanthamoeba spp. isolated from dust samples of air conditioners from a public hospital in Florianópolis, Santa Catarina, Brazil, as well as to investigate amoeba-resistant microorganisms (ARMs) in the isolates of Acanthamoeba spp. This study included 39 isolates from different hospital environments. The extraction of total DNA from the isolates of Acanthamoeba spp. was carried out from the axenic cultures. Amoebic DNA was subjected to polymerase chain reaction (PCR) using genus-specific primers and the obtained fragment was sequenced for genotype determination. The determination of the pathogenic potential of the isolates was done through osmotolerance and thermotolerance tests. Specific primers were used for PCR to evaluate the presence of Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas spp., Staphylococcus aureus and Legionella spp. as ARMs. All isolates previously characterized by morphology as belonging to the genus Acanthamoeba were confirmed by the PCR technique with the amplification of a fragment of approximately 500 bp. The analysis of the sequences obtained allowed to classify the isolates into three genotypes: T4, T5 and T11. In addition, 7 (18%) of the isolates were classified as pathogenic in phenotypic tests, 27 (69.2%) with intermediate pathogenicity and 5 (12.8%) as non-pathogenic. The study of ARMs revealed the presence of Klebsiella pneumoniae in 5 (12.8%) amoebic isolates, Pseudomonas spp. in all amoebic isolates, Legionella spp. in 26 (66.7%) amoebic isolates and Staphylococcus aureus in 7 (18%) of 39 amoebic isolates. Considering that all amebic isolates presented important microorganisms in infections related to health care, the data corroborate for the study of Acanthamoeba as an important biomarker of air quality in hospital environments. The results obtained in the present study deserve attention, since the amoebas present in the air conditioners may be serving as possible sources of infections in a hospital environment.