Avaliação da atividade antioxidante in vitro e in vivo de extratos de cascas de jabuticaba (Plinia peruviana) e sua atuação durante o processo de cicatrização

Abstract

O estresse oxidativo é resultado do desequilíbrio entre a produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e das defesas antioxidantes. Os metabólitos secundários de plantas podem ser usados como antioxidantes exógenos para prevenir doenças relacionadas ao estresse oxidativo. As cascas da jabuticaba (Plinia peruviana) são importantes fontes de moléculas antioxidantes como compostos fenólicos. Esse estudo teve como objetivo determinar o efeito antioxidante e citoprotetor de extratos hidroalcoólicos de cascas dos frutos de jabuticaba contra o estresse oxidativo induzido pelo H2O2 em modelo com fibroblastos da linhagem L929 e queratinócitos da linhagem HaCat. Além disso, a capacidade cicatrizante de feridas do extrato de cascas de jabuticaba foi avaliada em modelo de lesão contrátil em camundongos. Estudos da atividade antioxidante in vitro revelaram que os extratos foram efetivos no sequestro dos radicais 2,2-difenil-1-picril-hidrazila (DPPH) e peroxila. Proliferação dos fibroblastos L929 foi constatada na concentração de 100 µg/mL após 48 h de exposição ao extrato. Ação antioxidante foi observada apenas em fibroblastos tratados com extratos de cascas de jabuticaba nas concentrações de 25, 50 e 100 ??g/mL por 24 h seguido por exposição ao H2O2 durante 3 h. Após esse período, efeito citoprotetor foi observado. Essa ação detoxificante de ERO foi devido ao aumento nas atividades enzimáticas de catalase e de glutationa peroxidase. Os queratinócitos também apresentaram atividade de catalase aumentada. Os compostos cianidina-3-O-glicosídeo e ácido elágico, principais fitoquímicos encontrados nos extratos de cascas de jabuticaba, foram testados em modelo de estresse oxidativo induzido por H2O2 em fibroblastos e não foram capazes de promover citoproteção. Esses resultados mostraram que o conteúdo de polifenóis do extrato de jabuticaba tem atividade sinérgica no mecanismo de citoproteção. Estudos in vivo mostraram que lesões tratadas com extratos de cascas de jabuticaba não foram capazes de diminuir o tempo de fechamento das feridas de forma significativa. As atividades de superóxido dismutase e catalase das lesões dos camundongos não exibiram diferença significativa em relação aos controles não tratados após 2, 5 e 7 dias do ferimento. Extrato de jabuticaba 10% aumentou a peroxidação lipídica após 2 e 7 dias do ferimento. No conjunto, os resultados demonstraram um efeito positivo das cascas do fruto jabuticaba em fibroblastos linhagem L929 minimizando o dano causado pelo estresse oxidativo e aumentando a sobrevivência celular. Essas características são adequadas para propósitos cosméticos.

Abstract : Oxidative stress is a result of disturbance between the production of reactive oxygen species (ROS) and antioxidants defenses. Plant secondary metabolites can be used as exogenous antioxidants to prevent human oxidative stress-related diseases. Jaboticaba (Plinia peruviana) peels are an important source of antioxidant molecules such as phenolic compounds. This study aimed to determine the antioxidant and cytoprotective effects of hydroalcoholic extracts of jaboticaba fruit peel against H2O2-induced oxidative stress in a murine fibroblast (L929 cell line) and keratinocyte (HaCat) model. Besides, jaboticaba fruit peel extract wound healing properties was evaluated in a mouse contractile wound model. Jaboticaba fruit peel extract in vitro antioxidant studies showed a strong scavenging of DPPH and peroxyl radicals. Fibroblasts L929 proliferation was verified at 100 µg/mL after 48 h of extract exposure. Evaluation of antioxidant activity by H2O2-induced oxidative stress was performed in fibroblast L929 and keratinocyte HaCat cells. Cell treatment with jaboticaba fruit peel extract at 25, 50, and 100 µg/mL for 24 h followed by 3h-H2O2 exposure showed cytoprotective effect only in fibroblasts. These ROS detoxifying action was due to increased enzymatic activity of catalase and glutathione peroxidase in fibroblasts. Keratinocytes also presented catalase activity increased. Cyanidin-3-O-glucoside and elagic acid, main phytochemicals in jaboticaba fruit peel extract, were tested in H2O2-induced oxidative stress model and were not able to promote cytoprotection. This result reveals a synergy activity of jaboticaba extract s polyphenols in fibroblast cytoprotective mechanism. In vivo studies showed that jaboticaba extract treated-wounds did not decreased the healing time in a significant way. Wound mouse superoxide dismutase and catalase activity didn't exhibit significant difference of non-treated controls after 2, 5 and 7 days post wound. 10% jaboticaba extract increased lipid peroxidation after 2 and 7 days post wound. These results demonstrate a positive effect against ROS of jaboticaba fruit peels in L929 fibroblasts cell line, minimizing cell damage and increasing its survival. These features are suitable for cosmetic purpose.