Determinação de aminoácidos em amostras de conteúdo ileal de suínos utilizando a técnica de microextração em filme fino em sistema 96-Well Plate

Abstract

Uma nova abordagem para TF-SPME é apresentada usando a cortiça como fase extratora para a determinação de aminoácidos de interesse da suinocultura (glicina, alanina, valina, isoleucina, leucina, tirosina, fenilalanina e lisina) em amostras de conteúdo ileal de suínos. Utilizou-se TF-SPME combinado com o sistema 96 Well Plate, permitindo alta frequência analítica devido à possibilidade de extrações simultâneas de até 96 amostras e a quantificação dos aminoácidos foi feita por cromatografia líquida em analisador específico. A cortiça, sorvente utilizada com fase extratora mostrou-se eficiente e estável, sendo possível a reutilização da mesma por 15 ciclos de análise. O método otimizado consistiu, em 1mL da amostra hidrolisada como volume inicial, 60 minutos de tempo de extração sob agitação de 250 rpm, com pH menor que 1 e temperatura de 21°C. Para dessorção é utilizada uma solução tampão de citrato de sódio pH 2,2 durante 30 minutos sob agitação de 250 rpm. Os limites de detecção variaram de 0,04 µmol mL-1 para a fenilalanina até 0,09 µmol mL-1 para a valina. Os limites de quantificação obtidos foram de 0,12 µmol mL-1 para a fenilalanina até 0,29 µmol mL-1 para a valina, com R² variando de 0,968 para glicina a 0,999 para a isoleucina e leucina. Esta nova abordagem surge como uma alternativa bastante promissora para a análises em laboratórios de rotina, uma vez que a fase extratora é de baixo custo e fácil acesso e biodegradável, além de o método de preparo de amostras poder ser totalmente automatizado, permitindo uma análise múltipla, precisa, rápida e com economia de reagentes.

Abstract : In this study a new approach to TF-SPME is presented with a recommendation for the determination of amino acids of interest in swine production (glycine, alanine, valine, isoleucine, leucine, tyrosine, phenylalanine and lysine) in swine ileal content samples. TF-SPME combined with the Well Plate 96 system was used, allowing high analytical frequency due to the possibility of simultaneous extraction of up to 96 samplesand an amino acid quantification was done by liquid chromatography in specific analysis. The sorbent phase used (cork) was efficient and stable, being possible to reused at least for 15 cycles. The optimized method consisted of: 1 mL of the sample as the initial volume, 60 minutes of extraction, 250 rpm of stirring, pH<1 and room temperature (21°C). The sodium citrate buffer solution (pH 2.2) was used for desorption during 30 minutes under stirring at 250 rpm. Detection limits ranging from 0.04 µmol mL -1 for phenylalanine to 0.09 µmol mL -1 for valine. The limits of quantification obtained were from 0.12 µmol mL -1 for phenylalanine up to 0.29 µmol mL -1 for valine and the correlation coefficient ranging from 0.968 for glycine at 0.999 for and isoleucine and leucine. This new approach emerges as a very promising alternative for analysis in routine laboratories, since it is a sorbent phase of low cost, easy access and biodegradable. Besides, the extraction steps of the method are possible to be fully automated, it allows the analysis of many samples simultaneously showing accuracy, quickness and with reagent economy.