Padronização de reação em cadeia da polimerase (PCR) para a detecção de Trichomonas vaginalis em amostras de urina

Abstract

A tricomoníase é uma infecção sexualmente transmissível (IST) de grande importância mundial causada pelo protozoário flagelado Trichomonas vaginalis. Possui prevalência igual ou superior à prevalência combinada dos agentes bacterianos mais comuns de ISTs, Chlamydia trachomatis e Neisseria gonorrhoeae. No Brasil, a prevalência da tricomoníase é variada, apresentando valores de 3,2-13,9%, e a infecção possui uma clínica muitas vezes inespecífica, podendo ser confundida com outras ISTs. Cerca de 50-80% dos pacientes são assintomáticos, requerendo métodos diagnósticos com alta sensibilidade e especificidade. Pode-se classificar o diagnóstico da tricomoníase em quatro métodos: microscopia a fresco, cultura, detecção de antígeno e testes de amplificação de ácido nucleico.Além desses métodos o diagnóstico pode ser realizado pelo encontro fortuito do protozoário na microscopia do parcial de urina. O Protocolo Clínico e Diretrizes Terapêuticas em ISTs do Ministério da Saúde recomenda a microscopia a fresco ou microscopia com coloração indicando que a primeira possui alta especificidade (100%) e baixa sensibilidade (44%). O teste exige microscópio no local de coleta de amostra e profissional treinado já que se baseia no movimento do protozoário que pode morrer durante transporte. Sendo assim, resultados negativos na microscopia não podem excluir a presença de T. vaginalis o que torna necessária a utilização de métodos mais sensíveis ou métodos capazes de identificar o protozoário sem movimento. Neste contexto o presente trabalho teve como objetivo padronizar uma reação em cadeia da polimerase (PCR) convencional para detecção e T. vaginalis em amostras de urina. Selecionou-se um par de oligonucleotídeos iniciadores (primers) descrito na literatura que demonstrou bons resultados de sensibilidade e especificidade, além disso, foi realizado o desenho de oligonucleotídeos iniciadores, a fim de utiliza-los em PCR multiplex. Utilizou-se amostras de cultura ATCC 30236 para a realização da padronização com o intuito de obter-se o fragmento purificado para a realização da clonagem de DNA. Anterior à clonagem, foram utilizadas amostras de urina positivas para T. vaginalis para a padronização da reação com amostras biológicas, já que os resultados da PCR não apresentavam fragmento único de acordo com tamanho de fragmento esperado. Como resultados, foi possível verificar produtos de amplificação da PCR com tamanhos correspondentes aos descritos na literatura tanto em amostras de cultura como em amostras de urina, porém devido ao tempo reduzido para a realização deste trabalho e a clonagem tardia do fragmento específico de T. vaginalis, a padronização da PCR com amostras biológicas será realizada, posteriormente, assim como a os testes de sensibilidade e especificidade da PCR, para ampliar os recursos diagnósticos no laboratório de análise clínicas do HU/UFSC.