Avaliação de metodologias moleculares para diagnóstico das infecções por Neisseria gonorrhoeae e por Chlamydia trachomatis

Abstract

As infecções sexualmente transmissíveis (ISTs) representam um importante problema de saúde pública, principalmente em países em desenvolvimento. Chlamydia trachomatis e Neisseria gonorrhoeae juntas representam as ISTs de origem bacteriana mais prevalentes no mundo. O diagnóstico da infecção por N. gonorrhoeae é realizado principalmente por cultura em meios seletivos, enquanto o diagnóstico da C. trachomatis é frequentemente realizado por imunofluorescência direta. Os métodos diagnósticos de ambas as infecções vêm sendo substituídos por metodologias moleculares de maior sensibilidade, como a captura híbrida e recentemente os testes de amplificação dos ácidos nucleicos (NAAT). Nesse contexto, o objetivo do presente estudo foi padronizar uma PCR-Multiplex in house para a detecção simultânea de C. trachomatis e N. gonorrhoeae, validar com uma metodologia aprovada pelo FDA Xpert CT/NG (Cepheid), e comparar com outra metodologia comercialmente disponíveis o Kit Multiplex Uretrite Plus (XGEN), além de determinar a prevalência da infecção por N. gonorrhoeae e por C. trachomatis em gestantes de alto risco em trabalho de parto prematuro, atendidas na emergência obstétrica do Hospital Professor Polydoro Ernani de São Thiago (HU/UFSC). Foram analisadas 100 amostras, sendo uma de secreção ocular (de recém-nascido) e 99 de raspado endocervical que constituem um banco de amostras de gestantes atendidas na emergência obstétrica do HU/UFSC, no período de 2017 a 2018. O VPP e VPN da PCR multiplex in house foi de 91,7% e 61,4% para C. trachomatis e de 100% e 90,8% para N. gonorrhoeae. A sensibilidade para detecção de C. trachomatis e N. gonorrhoeae foi de 24,4% e 18,2%, respectivamente. A especificidade mostrou-se superior a 98,0% para ambos os alvos (98,2% para C. trachomatis e 100% para N. gonorrhoeae). A sensibilidade do kit XGEN Multi UP (XGEN) tanto para detecção de C. trachomatis quanto de N. gonorrhoeae foi de 35,6% e 63,6%, respectivamente. A especificidade foi de 98,2% para C. trachomatis e de 78,6% para N. gonorrhoeae. Os VPP e VPN foram de 94,1% e 65,0% para C. trachomatis e de 26,9% e 94,6% para N. gonorrhoeae. Além disso, o kit XGEN Multi UP (XGEN) apresentou 19,0% de resultados falso positivos para N. gonorrhoeae. A prevalência de infecção por C. trachomatis e N. gonorrhoeae pelo teste Xpert CT/NG foi de 45,5% e 10,1% respectivamente, com 3,0% de coinfecção. Somente infecção por C. trachomatis foi associada às gestantes com idade = 24 anos (p=0,038), RC: 2,5 (IC 95%: 1,080- 5,729; p= 0,032). Não foi observada associação entre a presença da infecção por N. gonorrhoeae com a da infecção por C. trachomatis. Além disso, a utilização do teste Xpert CT/NG, permitiu associar o trabalho de parto prematuro com infecções por C. trachomatis (45,4% [45/99]) e N. gonorrhoeae (11,1% [11/99]) em aproximadamente 55% das gestantes de alto risco atendidas no HU/UFSC. Essas ISTs frequentemente assintomáticas, são consideradas fatores de risco associados à ocorrência de parto prematuro, aborto, gravidez ectópica, infertilidade (em ambos os sexos) e acometimento ocular em recém-nascidos, podendo levar a cegueira. Assim, o presente estudo corrobora a importância da implementação do rastreio para C. trachomatis e N. gonorrhoeae em gestantes, utilizando um NAAT acurado, como uma medida decisiva para melhorar a saúde de mulheres e neonatos.

Abstract : Sexually transmitted infections (STIs) represent a major public health problem, especially in developing countries. Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae together represent the most prevalent bacterial STI in the world. The diagnosis of N. gonorrhoeae infection is mainly performed by culture in selective media, whereas the diagnosis of C. trachomatis is often performed by direct immunofluorescence. The diagnostic methods of both infections have been replaced by molecular methodologies with greater sensitivity, such as hybrid capture and recently nucleic acid amplification tests (NAATs). In this context, the aim of the present study was to standardize an in-house Multiplex PCR for the simultaneous detection of C. trachomatis and N. gonorrhoeae, to validate with a methodology approved by FDA - Xpert CT/NG (Cepheid), and to compare with another methodology commercially available - Urethritis Multiplex Plus (XGEN), besides, to determine the prevalence of N. gonorrhoeae and C. trachomatis infection in high-risk pregnant women of having a preterm labor, attended at the obstetric emergency of Professor Polydoro Ernani de São Thiago Hospital (HU/UFSC). A total of 100 samples were analyzed, one of ocular secretion (newborn) and 99 of endocervical scrapings which constitute a sample bank of pregnant women attended at the obstetric emergency of HU/UFSC, from 2017 to 2018. The PPV and NPV of in-house multiplex PCR were 91.7% and 61.4% for C. trachomatis and 100% and 90.8% for N. gonorrhoeae. The sensitivity for detection of C. trachomatis and N. gonorrhoeae was 24.4% and 18.2%, respectively. The specificity was higher than 98.0% for both targets (98.2% for C. trachomatis and 100% for N. gonorrhoeae). The sensitivity of the XGEN Multi UP kit (XGEN) for both C. trachomatis and N. gonorrhoeae was 35.6% and 63.6%, respectively. The specificity was 98.2% for C. trachomatis and 78.6% for N. gonorrhoeae. The PPV and NPV were 94.1% and 65.0% for C. trachomatis and 26.9% and 94.6% for N. gonorrhoeae. In addition, the XGEN Multi UP kit (XGEN) presented 19.0% false positive results for N. gonorrhoeae. The prevalence of C. trachomatis and N. gonorrhoeae infection by the Xpert CT/NG test was 45.5% and 10.1%, respectively, with 3.0% of coinfection. Only C. trachomatis infection was associated with pregnant women aged = 24 years (p = 0.038), CR: 2.5 (95% CI: 1.080-5.729, p = 0.032). It was not observed association between N. gonorrhoeae infection and C. trachomatis infection. In addition, the use of the Xpert CT/NG test allowed the association of preterm labor with C. trachomatis (45.4% [45/99]) and N. gonorrhoeae (11.1% [11/99]) infections in approximately 55% of the high-risk pregnant women attended at the HU/UFSC. These frequently asymptomatic STIs are considered risk factors associated with the occurrence of preterm birth, abortion, ectopic pregnancy, infertility (in both sexes) and ocular involvement in newborns, which may lead to blindness. Thus, the present study corroborates the importance of the implementation of screening for C. trachomatis and N. gonorrhoeae in pregnant women using an accurate NAAT as a decisive measure to improve the health of women and newborns.