Investigação do potencial amebicida do extrato bruto e compostos isolados de Eugenia hiemalis frente a Acanthamoeba spp.

Abstract

Acanthamoeba spp. são protozoários ubiquitários na biosfera. Nos humanos são agentes causadores de infecções, como a encefalite amebiana granulomatosa e ceratite amebiana. O tratamento destas infecções é inespecífico, baseado em diversas combinações de fármacos. Novas estratégias terapêuticas a partir da busca por compostos ativos de plantas medicinais vêm sendo investigadas para encontrar novas alternativas para o tratamento das infecções acantamebianas. O gênero Eugenia é comumente utilizado na medicina popular e estudos demostram atividade antimicrobiana, tripanocida e antifúngica. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi investigar o potencial antiamebiano do extrato bruto e compostos isolados de Eugenia hiemalis Cambessèdes visando combater infecções causadas por Acanthamoeba spp. Os testes de atividade amebicida foram realizados com a cepa de Acanthamoeba castellanii Neff e com um isolado clínico regional de Acanthamoeba spp. obtido a partir de raspado de córnea de paciente. Para a realização dos ensaios de atividade amebicida, os trofozoítos de Acanthamoeba spp. foram expostos a diversas concentrações do extrato bruto de E. hiemalis e aos compostos isolados acetato de miconidina e O-metil-olivetol. As células viáveis foram quantificadas em hemocitômetro, observando-se uma inibição de trofozoítos concentração-dependente. O tipo de morte celular causada pelo composto acetato de miconidina foi avaliado por meio da citometria de fluxo. A nanoemulsão rica em lipídeos contendo o composto isolado acetato de miconidina foi preparada apresentando um tamanho médio de 118,2 nm e características físico-químicas estáveis. A nanoemulsão contendo o acetato de miconidina foi testada frente aos trofozoítos de A. castellanii Neff, exibindo melhora significativa na atividade quando comparada ao composto livre, apresentando uma diminuição de cinco vezes o valor da CI50. A nanoemulsão contendo o composto foi capaz de reduzir parte da citotoxicidade frente a células de córnea de coelho quando comparada ao composto livre. Estes resultados sugerem que a nanoemulsão contendo o composto acetato de miconidina pode ser considerada uma potencial alternativa para o tratamento infecções causadas por Acanthamoeba spp.

Abstract : Acanthamoeba spp. are ubiquitous protozoa in the biosphere. In humans they are agents that cause infections, such as granulomatous amoebic encephalitis and amoebic keratitis. Treatment of these infections is non-specific, based on several combinations of drugs. New therapeutic strategies from the search for active compounds of medicinal plants have been investigated to find new alternatives for the treatment of amoebic infections. The genus Eugenia is commonly used in popular medicine and studies show antimicrobial, trypanocidal and antifungal activity. In this context, the objective of this study was to investigate the acantamoebic potential of the crude extract and isolated compounds of Eugenia hiemalis Cambessèdes in order to combat infections caused by Acanthamoeba spp. Amoebicidal activity tests were performed with the Acanthamoeba castellanii Neff strain and with a regional clinical isolate of Acanthamoeba spp. obtained from scraping patient's cornea. For the amoebicidal activity assays, the trophozoites of Acanthamoeba spp. strains were exposed to various concentrations of the crude extract and to the isolated compounds miconidine acetate and O-methyl-olivetol. Viable cells were quantified in hemocytometer, with concentration-dependent inhibition of trophozoites. The type of cell death caused by the miconidine acetate compound was evaluated by flow cytometry. The lipid-rich nanoemulsion containing the miconidine acetate compound was prepared having an average size of 118.2 nm and stable physico-chemical characteristics. The nanoemulsion containing the miconidine acetate was tested against Acanthamoeba spp. strains trophozoites, exhibiting significant improvement in activity when compared to the free compound, exhibiting a five-fold decrease in IC50 values. The nanoemulsion containing the miconidine acetate was able to reduce part of the cytotoxicity against rabbit corneal cells as compared to the free compound. These results suggest that the nanoemulsion containing the miconidine acetate compound may be considered a potential alternative for the treatment of infections caused by Acanthamoeba spp.