Produção de anticorpos policlonais IgY Anti-Malassezia pachydermatis em ovos de codorna e avaliação qualitativa de sua atividade antifúngica in vitro

Abstract

Os fungos do gênero Malassezia são importantes causadores de otites e outras infecções de pele oportunistas em cães e no homem, sendo a Malassezia pachydermatis o principal causador de otites de repetição em cães. O tratamento inadequado com o uso de antifúngicos tem gerado alguns fungos multirresistentes, o que torna o tratamento bastante demorado e em muitas vezes ineficiente. Por esse motivo, o uso de anticorpos para tratamento de doenças infecciosas, que havia sido reduzido após as descobertas de antibióticos, tem chamado novamente a atenção do meio científico. Nesse contexto, a produção de imunoglobulinas Y de ovos de aves tem se mostrado uma alternativa atrativa devido ao baixo custo de produção, ao resguardo do bemestar animal, ao aumento de produtividade, além de algumas vantagens biológicas como não interação do fator reumatoide e não ativação do sistema complemente em mamíferos. O objetivo principal do presente trabalho foi produzir anticorpos do tipo IgY contra Malassezia pachydermatis em ovos de codornas. O fungo Malassezia pachydermatis foi isolado e foi realizada uma suspensão para inoculação desses antígenos em codornas, as quais produziram anticorpos do tipo IgY que foram posteriormente extraídos das gemas dos ovos e isolados. Da mesma maneira, foram extraídos anticorpos IgY em codornas que não passaram pelo processo de inoculação de suspensão de Malassezia pachydermatis para controle negativo. Através de eletroforese em gel de poliacrilamida 10%, foi confirmada a presença de anticorpos IgY nas amostras que foram concentradas e utilizadas em teste de microdiluição em caldo modificado seguindo os padrões da CLSI para atividade de antifúngicos. De acordo com os resultados obtidos, foi possível produzir IgY anti-Malassezia pachydermatis em ovos de codornas, o qual se demonstrou eficaz na inibição de crescimento de Malassezia pachydermatis in vitro. Por sua vez, anticorpos IgY não anti-Malassezia não obtiveram o mesmo resultado, demonstrando a necessidade de especificidade do anticorpo para promover a inibição do crescimento do fungo.

Abstract: The yeasts of Malassezia are an important cause of otitis and other opportunistic skin infections in dogs and in humans, and The Malassezia pachydermatis is the main cause of recurrent otitis in dogs. The inadequate treatment with the use of antifungal agents has generated some multiresistant fungi, which makes the treatment quite time-consuming and often inefficient. For this reason, the use of antibodies to treat infectious diseases, which had been reduced after the antibiotic?s discovery, has again called the attention of the scientific community. In this context, the production of bird egg Y immunoglobulins has been shown to be an attractive alternative, due to the low cost of production, reduced animal welfare, increased production, and some biological advantages such as non-interaction of rheumatoid factor and non- activation of the complement system in mammals. In the present work, the yeasts of Malassezia pachydermatis was isolated and a suspension has made to inoculate these antigens in quails, which produced antibodies of the IgY type that were later extracted from egg yolks and isolated. Likewise, IgY antibodies were extracted in quail?s eggs that did not undergo the inoculation process of suspension of Malassezia pachydermatis for negative control. The presence of IgY antibodies in the samples that were concentrated and used in a modified broth microdilution test following an adaptation of the CLSI standards for antifungal activity was confirmed by 10% polyacrylamide gel electrophoresis. The evaluation of the test was performed in a visual and qualitative way. According to the results obtained, it was possible to produce anti-Malassezia pachydermatis IgY in quail eggs, which has been shown to be effective in inhibiting the growth of Malassezia pachydermatis in vitro. Non-anti-Malassezia IgY antibodies, on the other hand, did not achieve the same result, demonstrating the need for a certain specificity to promote inhibition of fungus growth.