Avaliação do efeito citotóxico de uma Orto-quinona isolada da alga parda Stypopodium zonale sobre células de linhagem de mieloma múltiplo

Abstract

O mieloma múltiplo (MM) é uma doença maligna clonal de células plasmocitárias que permanece incurável na atualidade. Assim, o objetivo deste estudo é investigar o efeito citotóxico da o-quinona stypoldiona, isolada da alga parda Stypopodium zonale, sobre células de linhagem de MM. O efeito citotóxico da stypoldiona foi avaliado pelo método do MTT em células MM1.S e células mononucleadas (CM) de sangue periférico. A stypoldiona apresentou, em células MM1.S, CI50 de 5,38 ± 0,38 µM, 2,49 ± 0,44 µM e 2,55 ± 0,53 µM em 24, 48 e 72 h, respectivamente, e CI50 de 24 h de 12,19 ± 0,41 µM em CM. A capacidade hemolítica da stypoldiona foi avaliada na concentração de até 10 x o valor de sua CI50 e não foi observada hemólise significativa. A morte por apoptose foi confirmada pela alteração da morfologia celular e pela exposição dos resíduos de fosfatidilserina por citometria de fluxo. Os resultados mostram que o mecanismo envolvido na morte celular induzida pela stypoldiona está relacionado a apoptose intrínseca e extrínseca, pois houve aumento da relação Bax/Bcl-2, perda do ??m, aumento de AIF e FasR e ativação de caspase-3. Além disso, o tratamento com o composto aumentou a expressão de Ki-67 e survivina e causou um aumento na formação de EROs. A stypoldiona também reduziu a expressão de NF-?B, Akt e pAkt, o que sugere o seu envolvimento na modulação dessas duas vias. O conjunto de resultados apresentados sugere que a stypoldiona é um bom candidato para o desenvolvimento de novos fármacos para a terapia contra o MM.

Abstract: Multiple myeloma (MM) is a clonal plasma cells malignancy that remains incurable at present. Thus, the objective of this study is to investigate the cytotoxic effect of stypoldione compound, isolated from brown alga Stypopodium zonale, on MM lineage cells. The cytotoxic effect of stypoldione was evaluated by the MTT method in MM1.S cells and PBMCs. Stypoldione presented, in MM1.S cells, IC50 of 5.38 ± 0.38 µM, 2.49 ± 0.44 µM and 2.55 ± 0.53 µM in 24, 48 and 72 h, respectively, and 24 h IC50 of 12.19 ± 0.41 µM in CM. The hemolytic capacity of stypoldione was evaluated at the concentration of up to 10 x the value of its IC50 and no significant hemolysis was observed. Death by apoptosis was confirmed by alteration of cell morphology and exposure of phosphatidylserine residues by flow cytometry. Results show that the mechanism involved in stypoldione-induced cell death is related to intrinsic and extrinsic apoptosis, since there was an increase in Bax/Bcl-2 ratio, loss of ??m, increase in AIF and FasR and activation of caspase-3. In addition, treatment with the compound increased Ki-67 and survivin expression and caused an increase in the formation of ROS. Stypoldione also reduced the expression of NF-?B, Akt and pAkt, which suggests its involvement in modulation of these two pathways. The results suggest that stypoldione is a good candidate for the development of new drugs for therapy against MM.