Desenvolvimento de carreadores lipídicos nanoestruturados via dupla emulsão para encapsulação do mRNA

Abstract

Atualmente, os carreadores lipídicos nanoestruturados são o sistema de entrega de genes não viral mais avançado clinicamente por sua capacidade de proteger o antígeno e por possuir em sua composição materiais lipídicos biocompatíveis e biodegradáveis que melhoram a transfecção da molécula de interesse. Assim, este trabalho tem como objetivo produzir carreadores lipídicos nanoestruturados a base de cera de abelha, para a encapsulação do mRNA, pela técnica de dupla emulsão, visando o tratamento de doenças virais. Os carreadores lipídicos nanoestruturados apresentaram diâmetro médio de 262,6 nm, com valor de distribuição de tamanho de 0,2 indicando um sistema parcialmente monodisperso, e potencial zeta de -40,46, indicando estabilidade coloidal do sistema. A determinação da eficiência de encapsulação dos RNAs totais de células HEK, foi realizada por espectrofotometria e obteve-se uma eficiência de encapsulação de 83%. No entanto, para assegurar a integridade do RNA encapsulado, realizou-se a extração do RNA de células HEK das formulações, separando a nanocápsula do sobrenadante e analisando o material extraído por PCR em gel de agarose. Os resultados indicaram que as nanocápsulas foram capazes de encapsular os RNAs de menor tamanho molecular, além de não ter sido detectado RNA no sobrenadante indicandoque não havia RNA fora das nanocápsulas. Na etapa seguinte um mRNA pequeno de 2500 pares de base foi encapsulado, e novamente realizou-se a extração dos mRNAs contidos nas nanocápsulas e no sobrenadante para análise PCR em gel de agarose. Os resultados mostraram que a técnica de dupla emulsão foi capaz de encapsular o mRNA, porém o mRNA não se manteve íntegro no seu interior, já no poço do sobrenadante não foi detectado mRNA. Por fim, após verificar a capacidade da técnica de dupla emulsão de encapsular o mRNA nos nanocarreadores de cera de abelha, as etapas futuras serão focadas na preservação da integridade do mRNA para que este possa desempenhar sua função in vivo.