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Abstract:
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O Mieloma Múltiplo (MM) é uma neoplasia hematológica de células plasmocitárias que, apesar de muitos trabalhos na área de novos alvos de investigação laboratorial e tratamento, permanece de difícil diagnóstico e incurável. O efeito do microambiente tumoral no desenvolvimento e sobrevivência das células neoplásicas é um dos fatores que estão relacionados à resistência ao tratamento e à progressão da doença em pacientes com MM. Dessa forma, o objetivo do presente estudo é investigar o envolvimento do microambiente tumoral no efeito citotóxico e nos principais mecanismos de morte celular de dois compostos sintéticos (dietilditiocarbamato [DETC] e 4-nitrochalcona [4NC]), em sua forma livre e encapsulados, de forma associada ou não a quimioterápicos, sobre células de linhagem de mieloma múltiplo. Considerando o período de isolamento devido à pandemia de Coronavírus, foi acrescentado ao plano de atividades um estudo in silico das propriedades físico-químicas, farmacocinéticas e farmacológicas de ambos os compostos, o qual foi realizado com o auxílio da plataforma online SwissADME. A parte experimental do projeto teve início com a análise do efeito citotóxico dos compostos livres (não encapsulados) diluídos em meio de cultura e/ou DMSO, onde as células MM1.S e as células mononucleadas do sangue periférico de indivíduos saudáveis (isoladas por Ficoll-Hypaque) foram incubadas com concentrações crescentes de DETC e 4NC em 24h, 48h e 72h, e avaliadas pelo ensaio do MTT. A partir dos resultados obtidos foi possível calcular as respectivas CI50. Na sequência, o potencial hemolítico de ambos os compostos foi avaliado por meio do teste de hemólise, no qual os eritrócitos do sangue periférico de indivíduos saudáveis foram isolados por centrifugação e incubados com concentrações crescentes dos compostos. Os resultados obtidos a partir da predição in silico das propriedades físico-químicas e biológicas indicaram que a estrutura química da 4NC é moderadamente solúvel em água, apresenta um score de biodisponibilidade oral de 0,55%, que ficou dentro de todas as regras para boa biodisponibilidade oral aplicadas (regras de Lipinski, Ghose, Veber, Egan e Muegge), que apresenta alta probabilidade de absorção gastrointestinal, possibilidade de permear a barreira hematoencefálica e possibilidade de que seja substrato para a P-gp. Já em relação ao DETC, a predição in silico demonstra que esse composto é altamente solúvel em água, apresenta um score de biodisponibilidade oral de 0,85%, que ficou dentro das regras de Lipinski, Veber e Egan, que apresenta alta absorção gastrointestinal e possibilidade de permear a barreira hematoencefálica. Quanto aos ensaios in vitro e ex vivo de viabilidade celular, observou-se que a 4NC apresenta atividade citotóxica significativa para as células de MM, de forma dependente do tempo e da concentração, com os seguintes valores de CI50: 49,56 ±1,15 μM (24h); 11,51 ± 0,81 μM (48h) e 7,45 ± 0,37 μM (72h). O mesmo foi observado em relação ao DETC diluído tanto em meio de cultura (DETCm) quanto em DMSO (DETCd). Os valores de CI50 obtidos para este composto foram 67,86 ± 2,38 μM e 58,85 ± 2,12 μM em 24h; 36,80 ± 0,82 μM e 23,72 ± 0,97 μM em 48h; e 15,83 ± 1,03 μM e 2,44 ± 0,54 μM em 72h, respectivamente. Adicionalmente, a partir das CI50 obtidas em células mononucleadas do sangue periférico de indivíduos saudáveis (4NC: ≈ 156,8 ± 6,25; DETCm: ≈ 223,1 ± 14,47 e DETCd: ≈ 257,0 ± 9,25) foi possível calcular o índice de seletividade e identificar que ambos os compostos apresentam moderada seletividade para as células de MM (4NC: IS = 3,16; DETCm: IS = 3,29; e DETCd: IS = 4,37), em relação a células não neoplásicas. Por fim, a taxa de hemólise para a 4NC variou de 1,66% a 14,89%, nas concentrações de 1x, 2x e 3x a CI50 de 24h. Para o DETCd, a variação foi de 0,30% a 0,64% e para o DETCm foi de 0,03% a 0,24%, nas respectivas concentrações. O único composto que resultou em hemólise significativa foi a 4NC, na concentração de 3x a CI50 (14,89% de hemólise). Os resultados parciais obtidos até o momento sugerem que ambos os compostos apresentaram atividade biológica sobre células de MM, com moderada seletividade para estas células neoplásicas e não foram citotóxicas para os eritrócitos de sangue periférico, com exceção da 4NC na concentração de 3x a CI50. Como perspectivas, encontra-se em andamento a avaliação do efeito citotóxico dos compostos nanoencapsulados, o efeito sinérgico da 4NC e do DETC com quimioterápicos já padronizados para o tratamento de MM (cisplatina, doxorrubicina e etoposídeo) e, paralelamente a isso, já foi iniciada a padronização da técnica de cocultivo celular. |
