Avaliação de modificações em dois métodos fenotípicos com menor tempo de resposta para triagem da resistência às polimixinas em isolados clínicos de Enterobacterales

Abstract

O surgimento de bacilos gram-negativos resistentes aos aminoglicosídeos, fluoroquinolonas e β-lactâmicos tornou as polimixinas a última opção para o tratamento de infecção por bactérias multirresistentes. Com isso, altas taxas de mortalidade envolvendo bacilos gram-negativos resistentes às polimixinas são de grande preocupação para condutas terapêuticas e desafiadoras para a rotina dos laboratórios clínicos, devido à falta de acurácia dos testes de sensibilidade de mais fácil realização, como disco-difusão e fita de gradiente de concentração e à dificuldade na execução do método referência (microdiluição em caldo) conforme ISO 20776-1. A proposta deste trabalho foi avaliar modificações em protocolos de dois métodos colorimétricos para triagem de resistência às polimixinas em isolados clínicos de Enterobacterales e comparar com o método referência. Os métodos avaliados foram os testes rápidos Andrade Screening Antimicrobial Test e Polimixina NP (Nordmann-Poirel). As modificações foram realizadas no protocolo de preparo, na composição da solução aquosa e na incorporação dos antimicrobianos. Os testes foram denominados como Andrade Screening Antimicrobial Test Modificado (ASAT-M) e POLI-NP-MOD, nos quais foram testados polimixinas B e colistina. Ao total, 149 isolados bacterianos foram testados. O coeficiente Kappa mostrou uma concordância categórica de 0,77 para o teste rápido ASAT-M com colistina e 0,80 com polimixina B. Já o teste rápido POLI-NP-MOD mostrou uma concordância categórica de 0,89 tanto para polimixina B quanto para colistina. ASAT-M com colistina e com polimixina B demonstraram very major error (VME) elevados de 25% e 19,23%, respectivamente. Para POLI-NP-MOD os resultados de VME foram de 13% para polimixina B e colistina. ASAT-M apresentou major error (ME) de 2,06% e 3,09% para colistina e polimixina B, respectivamente, enquanto POLI-NP-MOD não apresentou ME. Embora os testes tenham apresentado valores de VME inadequados, se mostraram de preparo fácil e barato, além de fornecerem resposta em poucas horas, reduzindo o tempo necessário para detectar isolados resistentes às polimixinas de 20 horas para 4 horas. Esses resultados

sugerem uma aplicabilidade útil e viável dos testes colorimétricos ASAT-M e POLI-NP- MOD para triagem de resistência às polimixinas na rotina clínica laboratorial, sendo necessário a confirmação com o método referência em isolados considerados sensíveis na triagem com estes testes rápidos.

The emergence of gram-negative bacilli resistant to aminoglycosides, fluoroquinolones, and β-lactams made polymyxins the last option for the treatment of infections caused by

multidrug-resistant bacteria. Thus, high mortality rates involving polymyxin-resistant gram- negative bacilli are of great concern for therapeutic approaches and are challenging for the

routine of clinical laboratories, due to the lack of accuracy of the sensitivity tests that are easier to perform, such as disk diffusion and concentration gradient tape and the difficulty in performing the reference method (broth microdilution) according to ISO 20776-1. The purpose of this work was to evaluate modifications in protocols of two colorimetric methods for screening for resistance to polymyxins in clinical isolates of Enterobacterales, compared with the reference method. The methods evaluated were the rapid tests Andrade Screening Antimicrobial Test and Polymyxin NP (Nordmann-Poirel). Modifications were carried out in the preparation protocol, in the composition of the aqueous solution, and the incorporation of antimicrobials into the test. Polymyxins B and colistin were tested. The tests were called Modified Andrade Screening Antimicrobial Test (ASAT-M) and POLI-NP-MOD, in which polymyxins B and colistin were tested. A total of 149 bacterial isolates were tested. The Kappa coefficient showed a categorical agreement of 0.77 for the ASAT-M rapid test with colistin and 0.80 with polymyxin B. The POLI-NP-MOD rapid test showed a categorical agreement of 0.89 for both polymyxin B and colistin. ASAT-M with colistin and with polymyxin B demonstrated elevated very major error (VME) of 25% and 19.23%, respectively. For POLI-NP-MOD, the VME results were 13% for polymyxin B and colistin. ASAT-M obtained ME of 2.06% and 3.09% for colistin and polymyxin B, respectively, while POLI-NP-MOD showed no ME. Although the tests showed inadequate VME values, they proved to be easy and inexpensive to prepare, in addition to providing a response within a few hours, reducing the time needed to detect polymyxin-resistant isolates from 20 hours to 4 hours. The results suggest useful and viable applicability of the ASAT-M and POLI-NP-MOD colorimetric tests for screening for polymyxin resistance in the clinical laboratory routine, requiring confirmation with the reference method in cases of isolates considered susceptible in the screening with these rapid colorimetric tests.