Investigação da participação do receptor TRPV1 no efeito irritativo do ditranol em camundongos

Abstract

O ditranol é um dos medicamentos tópicos mais eficazes para o tratamento da psoríase em placa. Porém, seu uso clínico é limitado por reações adversas irritantes à pele, como edema, eritema e prurido, cujos mecanismos não são compreendidos. A estimulação dos terminais periféricos das fibras sensoriais positivos para TRPV1 pode causar inflamação neurogênica, relacionada ao efeito adverso de alguns medicamentos. Como o componente neurogênico da irritação do ditranol é desconhecido, o objetivo do presente estudo foi verificar se os efeitos adversos do ditranol poderiam estar relacionados à estimulação das fibras positivas para TRPV1. Creme de ditranol foi aplicado topicamente na orelha direita de camundongos machos e fêmeas C57BL/6, sendo uma curva dose-resposta realizada para definir a dose irritativa mínima de ditranol (0,01%, 0,1% e 0,5% - 6 µg/orelha). Nos animais controle, apenas o creme Lanette foi aplicado. Edema (diferença na espessura da orelha após o tratamento em comparação com a linha de base ? ?/mm), eritema (escores) e prurido (coceira após aplicação de filamento de von Frey 0,02 g) foram investigados de 2 horas a 6 dias após a aplicação de ditranol. Para investigar se a desfuncionalização das fibras positivas para TRPV1 reduzia os efeitos irritantes, os animais foram pré-tratados topicamente (3 vezes, em dias alternados) com creme contendo 1% de capsaicina (um agonista do receptor TRPV1) e posteriormente tratados com ditranol. Para investigar o efeito da dessensibilização do TRPV1, o salicilato (2%) foi adicionado a formulação de ditranol. Também foram coletados tecidos de animais tratados com ditranol para verificar a expressão do TRPV1 por qPCR. O tratamento tópico com ditranol (0,5%) causou edema e eritema, mas não prurido, começando às 6 h, com pico em 1 dia e durando até 6 dias após o tratamento em machos. No pico da irritação (1 dia), a dose mínima de ditranol que causou edema foi de 0,5%. Vinte e quatro horas após a aplicação, ocorreu redução do RNAm codificante para o TRPV1 na orelha, aumento no linfonodo drenante, sem nenhuma modificação em neurônios sensoriais. Após o primeiro tratamento, a aplicação tópica de capsaicina 1% produziu uma resposta edematogênica marcada 1 hora após a primeira aplicação quando comparada ao veículo. Demonstrando a desfuncionalização das fibras positivas para TRPV1 na pele aplicada, a capsaicina não foi capaz de causar edema após a segunda e terceira aplicação. Além de não reduzir a fase inicial (6 h a 4 dias) da irritação de pele induzida por ditranol (0,5%), a desfuncionalização das fibras TRPV1 positivas aumentou seu efeito irritante na fase tardia (5-6 dias). O mesmo fenômeno foi observado com a dessensibilização do TRPV1 induzida por salicilato. O presente estudo mostra que a aplicação tópica de ditranol em orelhas de camundongos causa resposta irritativa que é independente da ativação de fibras positivas para TRPV1 na sua fase inicial. Esses resultados sugerem que a irritação cutânea inicial causada pelo ditranol não envolve o componente neurogênico TRPV1.

Abstract: Dithranol is one of the most effective topical drugs for the treatment of plaque-type psoriasis. However, its clinical use is limited by irritating adverse reactions at skin, such as edema, erythema and pruritus, whose mechanisms are not understood. The stimulation of TRPV1 positive peripheral terminals of sensory fibers may cause neurogenic inflammation, related to adverse effect of some drugs. Since the neurogenic component of dithranol irritation is unknown, the purpose of the present study was to verify whether the adverse effects of dithranol could be related to the stimulation of TRPV1 positive fibers. Dithranol cream was applied topically to the right ear of male and female C57BL/6 mice, and a dose-response curve was performed to define the minimal irritative dose of dithranol (0.01%, 0.1% and 0.5% - 6µg/ear). In control animals, only Lanette cream was applied. Edema (difference in ear thickness after treatment compared to baseline ? ?/mm), erythema (scores) and pruritus (scratching after von Frey filament 0.02 g application) were investigated from 2 hours to 6 days after dithranol application. To investigate whether the desensitization of TRPV1 positive fibers reduced the irritant effects, animals were topically pretreated repeatedly (3 times, every other day) with cream containing 1% capsaicin (a TRPV1 receptor agonist) and then treated with dithranol. To investigate the desensitizing effect of TRPV1, salicylate (2%) was added to the dithranol formulation. Tissues from animals treated with dithranol were also collected to verify TRPV1 expression by qPCR. Topical treatment with 0.5% dithranol caused edema and erythema, but not pruritus, starting at 6 am, peaking at 1 day and lasting up to 6 days after treatment in males. At the peak of irritation (1 day), the minimum dose of dithranol that caused edema was 0.5%. Twenty-four hours after application, there was a reduction in the mRNA encoding TRPV1 in the ear, an increase in the draining lymph node, without any modification in sensory neurons. After the first treatment, topical application of 1% capsaicin produced a marked edematogenic response 1 hour after the first application when compared to vehicle. Demonstrating the defunctionalization of TRPV1 positive fibers at the applied skin, capsaicin was unable to cause edema after the second and third application. In addition to not reducing the initial phase (6 h to 4 days) of dithranol-induced skin irritation (0.5%), the defunctionalization of TRPV1 positive fibers increased its irritating effect in the late phase (5- 6 days). The same phenomenon was observed with salicylate-induced desensitization of TRPV1. The present study shows that the topical application of dithranol in mouse ears causes an irritative response that is independent of the activation of TRPV1-positive fibers in its initial phase. These results suggest that skin irritation caused by dithranol does not involve the neurogenic component TRPV1.