Avaliação dos mecanismos citotóxicos induzidos pelos compostos sintéticos inéditos derivados da imidazopiridinas, do ácido cinâmico e do composto natural isolado da alga Desmarestia menziesii sobre células de linfoma de Burkitt

Abstract

O linfoma de Burkitt (LB) é uma neoplasia linfoide de células B maduras do centro germinativo. Devido à agressividade dessa neoplasia, o tratamento deve ser iniciado rapidamente, a fim de evitar o acometimento do sistema nervoso central (SNC). Apesar da inovação na indústria farmacêutica, essa doença possui altas taxas de recidiva e mortalidade. Assim, este estudo objetivou avaliar o efeito citotóxico de novos produtos de origem sintética e natural sobre células de linhagem de LB, além de investigar seus principais mecanismos de morte celular. Inicialmente, foi avaliado o efeito citotóxico de 19 compostos (18 sintéticos e um composto natural) sobre células Daudi pelo método do Brometo de 3-(4,5-dimetil-2- tiazolil)-2,5-difenil-2H-tetrazólio (MTT). Os compostos DSH65 e AP12 apresentaram maior citotoxicidade e, por isso, foram selecionados para dar continuidade ao estudo; que se iniciou com as curvas de tempos e concentrações respostas para a obtenção das concentrações inibitórias de 50 % (CI50). O DSH65 apresentou CI50 de 50,14 ± 3,14 µM, 17,62 ± 0,87 µM e 13,12 ± 0,71 µM em 24, 48 e 72 h, respectivamente. Já o composto AP12 apresentou CI50 de 51,86 ± 2,22 µM, 33,88 ± 1,86 µM e 15,13 ± 0,89 µM em 24, 48 e 72 h, respectivamente. Em seguida, os compostos foram avaliados em células mononucleares (CM), em que foi observada para o composto DSH65 a CI50 de 24h de 74,08 ± 1,62 µM e para o composto AP12 CI50 de 24 h de 130,9 ± 2,95 µM. Foi avaliada a capacidade hemolítica dos compostos em até 10x a CI50 de 48 h dos mesmos e não foi observada hemólise significativa. A morte celular causada por apoptose após incubação com os compostos DSH65 e AP12 foi confirmada por meio da morfologia celular e por citometria de fluxo pela identificação da externalização de resíduos de fosfatidilserina. Os resultados apresentados para os compostos DSH65 e AP12 mostraram que o mecanismo de ação envolve a apoptose intrínseca, pois houve aumento da relação Bax/Bcl-2, perda do potencial de membrana mitocondrial (??m) e ativação de caspase-3. A incubação com o composto DSH65 também diminuiu a expressão da proteína de resistência survivina e do marcado de proliferação celular Ki-67. Ambos os compostos aumentaram a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs). A partir do conjunto de resultados apresentados, sugere-se que ambos os compostos são bons candidatos para desenvolvimento de novos fármacos contra o LB.

Abstract: Burkitt lymphoma (BL) is a germinal center-derived B-cell neoplasm. Due to the aggressiveness of this neoplasm, treatment must be started rapidly, in order to avoid CNS involvement. Although innovation in the pharmaceutical industry, the disease still has high recurrence and mortality rates. Thus, this study aimed to evaluate the cytotoxic effect of new products of synthetic and natural origin on LB lineage cells, in addition to investigating their main mechanisms of cell death. Initially, the cytotoxic effect of 19 compounds (18 synthetic and one natural compound) on Daudi cells was evaluated by the (3-(4,5-Dimethylthiazol-2- yl)-2,5-Diphenyltetrazolium Bromide) method (MTT). The compounds DSH65 and AP12 showed greater cytotoxicity, and, therefore, were selected to continue the study; which began with the concentration-and-time-response curves, to obtain the 50 % inhibitory concentration IC50. DSH65 presented IC50 of 50.14 ± 3.14 µM, 17.62 ± 0.87 µM and 13.12 ± 0.71 µM at 24, 48 and 72 h, respectively. The compound AP12 presented IC50 of 51.86 ± 2.22 µM, 33.88 ± 1.86 µM and 15.13 ± 0.89 µM in 24, 48 and 72 h, respectively. Then, the compounds were formulated in peripheral blood mononuclear cells (PBMC), where it was observed for the compound DSH65 a 24 h IC50 of 74.08 ± 1.62 µM and for the compound AP12 24 h IC50 of 130.9 ± 2, 95 µM. The hemolytic effect of the compounds was evaluated up to 10 x their 48 h IC50 and no significant hemolysis was observed. Cell death caused by apoptosis after incubation the compounds DSH65 and AP12 was confirmed through cell morphology and the externalization of phosphatidylserine residues by flow cytometry. The results presented for the compounds DSH65 and AP12 show that the mechanism of action involves with intrinsic apoptosis pathway, with an increase in the Bax/Bcl-2 ratio, loss of mitochondrial membrane potential (??m) and caspase-3 activation. Incubation with the compound DSH65 also decreased the expression of the survivin resistance protein and the cell proliferation marker Ki-67. Both compounds increased oxigen-reactive species (ROS) production. The results presented suggest that both compounds are good candidates for the development of new drugs for BL.