Análise da estrutura e função de uma proteína de capsídeo obtida por evolução artificial guiada

Abstract

A utilização de ferramentas in sílico para o desenvolvimento de proteínas artificiais, aliadas com técnicas de produção, purificação e caracterização, é uma estratégia poderosa para a produção de partículas com propriedades semelhantes aos capsídeos icosaédricos virais. Essa sequência de métodos auxilia no entendimento de como a estrutura conservada das proteínas de capsídeo se relaciona com sua função, além da produção de novas nanopartículas multifuncionais. Nesse contexto, o trabalho em questão visou a produção, purificação e caracterização de uma proteína gerada in silico por evolução artificial guiada com potencial para formação de uma nanopartícula proteica. A proteína, denominada LDI-CP, foi expressa em sistema procarioto e purificada parcialmente através de ultracentrifugação utilizando colchão/gradiente de sacarose e cromatografia. Observações por meio de microscopia eletrônica de transmissão mostraram que a LDI-CP apresentou formas achatadas e com diâmetro de 20 nm. Análises físico-químicas demonstraram a formação de nanopartículas com raio hidrodinâmico de 30 nm estáveis em temperatura ambiente, indicando uma autoassociação da proteína em solução. Além disso, foi produzido soro imunorreativo em camundongos anti-LDI-CP, podendo ser utilizado para sua detecção em futuros trabalhos. Os resultados deste trabalho contribuirão para a produção de uma VLP artificial com potenciais aplicações como nanoencapsulação de vacinas ou como possíveis carreadores de drogas para entrega direcionada.