Caracterização molecular e funcional das amastinas e tuzina do trypanosoma rangeli

Abstract

O Trypanosoma rangeli, é um protozoário de ciclo heteroxênico, e para que esta alternância de hospedeiros ocorra, o parasito possui uma regulação gênica em nível pós- transcricional, que permite rápida mudança nos padrões de expressão gênica, possibilitando uma adaptação do parasito a diferentes ambientes. As amastinas constituem uma família multigênica, subdividida em quatro grupos: a, ß, ? e d. Genes representativos de amastinas estão presentes no genoma do T. rangeli, mas o seu padrão de expressão, localização celular, envolvimento na interação com células do hospedeiro neste parasito ainda precisam ser investigados. Sendo assim, este estudo, têm como objetivo avaliar o ciclo celular do Trypanosoma rangeli com a finalidade de atribuir o possível papel das amastinas e tuzina na interação parasito/hospedeiro. Neste trabalho foram identificados 21 (sendo quatro genes truncados) genes pertencentes à família das amastinas, divididos em sete grupos, e um gene referente à tuzina e ambos com localização membranar. Através de uma análise filogenética, classificar esses genes de amastinas como pertencentes ao grupo das a, ß e d-amastinas. Analisamos dois genes de duas diferentes subfamílias TrAma7_1 (ß ?amastina) e TrAma4_1 (a-amastina) quanto a produção dos níveis de transcritos e de expressão proteica, observamos que ambos os genes produzem níveis de transcritos nas formas evolutivas epimastigotas e tripomastigotas com diferença entre as mesmas, mas, apenas para TrAma4_1 foi observada a expressão proteica no Western blot. Para Tuzina, observamos que as mesmas encontram-se intercaladas no genoma com as d-amastinas, e apresar de os níveis de transcritos serem diferentes entre diferentes formas evolutivas analisadas, os níveis de proteína expressa são iguais entre todas as formas, tanto para T. rangeli e T. cruzi. Com isso, observamos então que o nível de proteína expressa não é estágio dependendo como a produção dos níveis de transcritos, para ambos os genes. Parasitos da cepa Choachí de T. rangeli foram transfectados com amastinas de T. cruzi de duas diferentes subfamílias e com a TrAma4_1 de T. rangeli fusionadas com GFP, e com base nos resultados encontrados no estudo in vivo da infecção experimental com essas cepas transfectadas em comparação com a cepa parental pudemos observar que não houveram diferenças significativas na evolução da infecção.

Abstract : Trypanosoma rangeli is a protozoan of heteroxenic cycle and for this host alternation to occur the parasite has a post-transcriptional level of gene regulation that allows a rapid change in the gene expression patterns, allowing an adaptation of the parasite to different environments. The amastins constitute a multigenic family, subdivided into four groups: a, ß, ? and d. Representative amastin genes are present in the T. rangeli genome, but their pattern of expression, cell localization, involvement with host cells interaction in this parasite still needs to be investigated. Thus, this study aims to evaluate the cell cycle of Trypanosoma rangeli in order to attribute the possible role of amastines and tuzin in the parasite/host interaction. In this work 21 genes (those: four are truncated genes) were identified belonging to the amastine family, divided into seven groups, and one gene related to the tuzin and both of them with membrane localization. Through a phylogenetic analysis, these amastine genes were classify belonging to the a, ß and d-amastins group. We analyzed two different genes from two different amastin subfamilies: TrAma7_1 (ß-amastine) and TrAma4_1 (a -amastine) for the production of transcript levels and protein expression, and we observed that both genes produce levels of transcripts in epimastigote and trypomastigote evolutionary forms with difference between thenselves but only for TrAma4_1 was observed protein expression in the Western blot. For Tuzin, we observed that they are intercalated in the genome with the d-amastines, and the transcript levels are different between different evolutionary forms analyzed, expressed protein levels are equal between all forms, both for T. rangeli and T. cruzi. So, until now we observed that the protein expression levels are not stage specific, diferent os the transcriptions levels. Parasites of T. rangeli strain Choachi were transfected with four different T. cruzi amastins from two different subfamilies and with T. rangeli TrAma4_1 and fused with GFP, and based on the results found in the in vivo study of the experimental infection with these strains transfected into comparison with the parental strain showed that there were no significant differences in the evolution of the infection.