Importância dos biomarcadores RE, RP, HER2, KI67, CK19, CD4, CD8, CD45, CTLA-4, PD1 E PD-L1 para o diagnóstico, prognóstico e avaliação do risco de metástase em pacientes com carcinoma de mama

Abstract

O carcinoma de mama (CDI) apresenta elevada incidência entre as mulheres no mundo, com um forte impacto financeiro sobre os sistemas de saúde pública. O diagnóstico é realizado por biópsias de nódulos suspeitos rastreados mamograficamente. No entanto, muitas mulheres não fazem parte do grupo idade para rastreio populacional, e, por isso, apresentam doenças avançadas ao diagnóstico, causando impacto na sobrevida. A doença metastática é a principal causa de morte, e, uma das principais causas da metástase são células dormentes na circulação. Há indícios que essas células desenvolvam mecanismos para evitar a resposta imune do hospedeiro, por isso, estão associadas com imunofenótipos mais agressivos da doença. Além disso, subtipos de pior prognóstico também expressam algumas proteínas relacionadas à resposta imune, como o PD-L1. Assim, compreender as associações entre parâmetros e produtos de expressão proteica são determinantes para estabelecer alternativas que auxiliem no diagnóstico e tratamento do CDI. Estudos pioneiros do grupo de Stanford mostraram um perfil molecular do câncer de mama pela expressão de genes, associando a comportamentos biológicos e imunofenótipos distintos. Recentemente outros produtos deexpressão proteica, como PDL1, PD1, CTLA-4, CK19, vem tendo destaque nas pesquisas com CDI, mas associações entre esses biomarcadores ainda não foram investigadas. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a importância da análise conjunta dos biomarcadores RE, RP, HER2, Ki67, CK19, CD8, PD1, CTLA-4 e PD-L1 para o diagnóstico, prognóstico e avaliação do risco de metástase em pacientes com CDI. O estudo foi dividido em faseretrospectiva, que investigou o perfil epidemiológico, variáveis anatomopatológicas e imuno- histoquímicas (IHQ) da população atendida no HU/UFSC entre 1994 e 2018 e estudo prospectivo, no qual foram estudados os biomarcadores RE, RP, HER2, Ki-67, CK19, CD8, CTLA4, PD1 e PD-L1 pelas metodologias de citometria de fluxo (CF) e/ou IHQ. No estudo retrospectivo, foi observada alta concordância ao agrupar casos utilizando RE e HER2 ou quatro biomarcadores (RE, RP, HER2 e Ki67) mostrando que é possível aplicar ferramentas economicamente acessíveis no diagnóstico do câncer de mama. Os resultados do estudoprospectivos mostram que: o PDL1 por IHQ está associado a subtipos de pior prognóstico; de todos os leucócitos presentes no sangue periférico, os linfócitos T GamaDelta apresentaram-se reduzidos nas amostras com CDI; nas amostras histológicas foi observado diminuição das células NKT e diminuição da relação de linfócitos TCD4/CD8; a população de linfócitos T DuploNegativo está ligeiramente aumentada no subtipo luminal A e aumenta nos subtipos HER2 e TBNC; os linfócitos TCD4 e TCD8 no sangue periférico de pacientes com CDI apresentaram aumento de expressão dos biomarcadores CTLA4 e PD1 quando comparadas aocontrole. Em relação a investigação de células tumorais circulantes (CTC), elas foram detectadas em 6.38% do CDI. Os resultados dessa investigação mostram a importância da avaliação conjunta dos biomarcadores para avaliar a resposta imune e a capacidade da CF para detectar com segurança e agilidade CTC, para acompanhamento do CDI.

Abstract: Breast cancer (BC) has a high incidence among women worldwide, with a strong financial impact on public health systems. Biopsies make the diagnosis of suspicious nodules screened by mammography. However, many women are not part of the age group for population screening and, therefore, have advanced diseases at diagnosis, impacting survival. Metastatic disease is the leading cause of death, and one of the main causes of metastasis is dormant cells in the circulation. There is evidence that these cells develop mechanisms to evade the host's immune response; therefore, they are associated with more aggressive immunophenotypes of the disease. In addition, subtypes with a worse prognosis also express some proteins related to the immune response, such as PD-L1. Thus, understanding the associations between parameters and protein expression products is essential to establish alternatives that help diagnose and treat BC. Pioneering studies by the Stanford group showed a molecular profile of breast cancer through gene expression, associating it with different biological behaviours and immunophenotypes. Recently, other protein expression products, such as PDL1, PD1, CTLA- 4, CK19 have gained prominence in BC research, but these biomarkers' associations have not yet been investigated. Thus, this study aimed to evaluate the importance of joint analysis of the biomarkers RE, RP, HER2, Ki67, CK19, CD8, PD1, CTLA-4 and PD-L1 for the diagnosis, prognosis, and assessment of the risk of metastasis in patients with breast carcinoma. The study was divided into a retrospective phase, whose population investigated the epidemiological profile, anatomopathological and immunohistochemical variables of those treated at the HU/UFSC between 1994 and 2018, and a prospective study, in which the biomarkers RE, RP, HER2, Ki - 67 CK19, CD8, CTLA4, PD1 and PD-L1 were studied by flow cytometry or immunohistochemistry (IHC) methodologies. In the retrospective study, a high agreement was observed when grouping cases using ER and HER2 or four biomarkers (RE, RP, HER2 and Ki67), showing that it is possible to apply accessible tools in diagnosing breast cancer. The prospective study results show that PDL1 by IHC is associated with subtypes of worse prognosis. Of all the leukocytes present in peripheral blood, GD T lymphocytes were reduced in samples with ICD. There was a decrease in NKT cells and a decrease in the ratio of TCD4/CD8 lymphocytes in the histological samples. The population of DN T lymphocytes is slightly increased in the luminal A subtype and increases in the HER2 and TBNC subtypes. TCD4 and TCD8 lymphocytes in peripheral blood of patients with BC showed increased expression of biomarkers CTLA4 and PD1 compared to control. Regarding the investigation of circulant cell tumour (CTC), they were detected in 6.38% of cases with BC. This investigation shows the importance of joint assessment of biomarkers andthe ability of flow cytometry to detect CTC safely and quickly for monitoring BC.