Avaliação da qualidade do sêmen humano utilizando métodos de análise padrão e coadjuvantes

Abstract

Introdução: Problemas de fertilidade vem se tornando cada vez mais frequentes entre casais no mundo e sabe-se que cerca de um terço dos casos de infertilidade tem um componente masculino como causa. O ponto de partida da investigação de infertilidade masculina é a análise do sêmen. Testes de rotina como o espermograma, bem como testes complementares, podem ser aplicados para investigar a infertilidade masculina. Objetivos: Avaliar a relação entre hábitos de vida e qualidade do sêmen, estudar a influência das condições de armazenamento sobre os parâmetros espermáticos e avaliar a precisão e a acurácia do hemocitômetro de Neubauer e da câmara de Makler como métodos de determinação de concentração de espermatozoides. Método: Foi realizado um estudo transversal entre abril e setembro de 2022 envolvendo a investigação de parâmetros do sêmen e hábitos de vida de alunos e colaboradores da Universidade Federal de Santa Catarina. Os participantes responderam questionários sobre seus hábitos de vida, percepção de estresse e eventos de vida estressantes. Amostras de sêmen foram coletadas após abstinência sexual de 2 a 7 dias. Após liquefação, parâmetros do espermograma e análise de dano à integridade da cromatina espermática com coloração de azul de toluidina foram realizados. Os parâmetros de concentração, vitalidade e motilidade foram reanalisados após armazenamento das amostras em temperaturas de 4ºC e 37ºC por três horas. O hemocitômetro de Neubauer e a câmara de Makler foram comparados para determinação de concentração de esferas de látex e de amostras do estudo. Resultados: Ao todo,192 participantes foram incluídos na análise. A frequência de alteração dos parâmetros seminais foi de 21,9%. O dano à integridade da cromatina apresentou correlação negativa com os parâmetros de vitalidade, motilidade progressiva, e morfologia normal, mas não com os parâmetros de volume, concentração ou contagem total de espermatozoides. A análise de hábitos de vida e qualidade do sêmen demostrou que cirurgia pélvica, depressão, frequência do uso do telefone celular, varicocele e relato de sintomas graves ou hospitalização por COVID-19 foram associados com prejuízo de parâmetros espermáticos. Maior dano à integridade da cromatina espermática foi associada a redução de concentração de espermatozoides, enquanto amostras com menor dano da cromatina apresentaram concentração estável após três horas de armazenamento tanto a 4ºC como a 37ºC. As estimativas no hemocitômetro de Neubauer foram mais precisas e acuradas do que na câmara de Makler. A concordância entre as câmaras foi ruim para valores de concentração espermática inferiores a 40,0 x 106/ml. Conclusão: Alguns aspectos de hábitos de vida podem ser responsáveis por levar ao prejuízo de parâmetros espermáticos. Além de testes de rotina, a avaliação de dano à integridade da cromatina com azul de toluidina pode ser um método alternativo simples e barato para avaliar a capacidade funcional de espermatozoides. Por fim, a câmara de Makler é um substituto ruim para determinar a concentração espermática e as medições apresentam maior precisão e acurácia com o hemocitômetro de Neubauer.

Abstract: Introduction: Fertility problems are becoming more common among couples worldwide and about a third of infertility cases have a male component as the cause. The starting point of male infertility investigation is semen analysis. Routine tests such as the spermogram, as well as additional tests can be applied to investigate male infertility. Objectives: Evaluate the relationship between life habits and semen quality, study the influence of storage conditions on sperm parameters and evaluate the precision and accuracy of the Neubauer hemocytometer and the Makler chamber as sperm concentration methods. Methods: A cross-section study was performed between April and September 2022 involving the investigation of semen parameters and lifestyle habits of students and collaborators of the Federal University of Santa Catarina. Participants answered questionnaires about their lifestyle habits, perception of stress and stressful life events. Semen samples were collected after sexual abstinence for 2 to 7 days. After liquefaction, spermogram parameters and analysis of damage to sperm chromatin integrity with toluidine blue staining were performed. The concentration, vitality and motility parameters were reassessed after storing samples at temperatures of 4ºC and 37ºC for three hours. The Neubauer hemocytometer and the Makler chamber were compared to determine the concentration of latex beads and study samples. Results: In all, 192 participants were included in the analysis. Prevalence of changes in seminal parameters was 21.9%. Damage to chromatin integrity of was negatively correlated with the parameters of vitality, progressive motility, and normal morphology, but not with parameters of volume, concentration, or total sperm count. The analysis of lifestyle habits and semen quality showed that pelvic surgery, depression, frequency of cell phone use, varicocele, and reporting of severe symptoms or hospitalization for COVID-19 were associated with impairment of sperm parameters. Greater damage to sperm chromatin integrity was associated with reduced sperm concentration, while samples with less chromatin damage showed stable concentration after three hours of storage both at 4ºC and 37ºC. The estimates in the Neubauer hemocytometer were more precise and accurate than in the Makler chamber. The agreement chambers were poor for sperm concentration values below 40.0 x 106/ml. Conclusion: Some aspects of life habits may be responsible for impairing sperm parameters. In addition to routine tests, the assessment of damage to chromatin integrity with toluidine blue can be a simple and inexpensive alternative method to assess the functional capacity of spermatozoa. Finally, the Makler chamber is a poor substitute for determining sperm concentration and measurements are more precise and accurate with the Neubauer hemocytometer.