Distribuição viral, desinfecção e valoração nutricional de ostras Crassostrea gigas bioacumuladas e depuradas na presença de produtos naturais

Abstract

O objetivo desta pesquisa foi estudar a distribuição tecidual de contaminantes virais e desempenho da desinfecção e valoração nutricional de ostras Crassostrea gigas, mediado pelo processo de depuração associado a produtos naturais. Para testes de avaliação da distribuição viral do norovírus murino (MNV-1) e bacteriófagos (colifagos somáticos e F-específicos), ostras foram alocadas em aquário com água do mar natural e 5x10³ Unidade Formadora de Placas (UFP) de colifagos somáticos e F-específicos e 7x109 UFP de MNV-1. Para cada teste, três ostras foram coletadas de cada aquário nos tempos de 0, 4, 6 e 24 horas após a adição dos bacteriófagos e do MNV-1. As ostras tiveram seu manto (MT), brânquias (BR) e tecido digestivo (TD) dissecados. Para o teste de distribuição de fagos, as amostras foram eluídas em TPB (Tampão de Fosfato de Triptose), e os fagos foram quantificados nos tecidos usando a técnica de duplo ágar. Para o MNV-1, cada pool foi submetido à concentração viral por polietilenoglicol 6000 (PEG 6000). A distribuição de MNV-1 em MT, BR e TD foi medida por ensaio de placa de lise (UFP de vírus infecciosos) e cópias de genes (CG) por RT-qPCR. Para a avaliação da inativação de norovírus (NoV) e bactérias por Curcuma longa e Planktochlorella nurekis em ostras Crassostrea gigas vivas. Ostras foram bioacumuladas com MNV-1 e Escherichia coli e submetidas ao processo de depuração, associado a Curcuma longa e Planktochlorella nurekis. Cada amostra (pool de três ostras) tiveram seus tecidos digestivos (TD) dissecados. As amostras foram submetidas à concentração de MNV-1 usando polietilenoglicol 6000. A quantificação viral foi realizada por Placa de Lise (UFP) e RT-qPCR (CG), respectivamente. Para a quantificação de bactérias, alíquotas de 100 µL nas diluições 10-2 e 10-4 foram inoculadas em placa com meio LB e placa com meio Maconkey e depois de 48 horas foi realizada a contagem das colônias. Os parâmetros físico-químicos da água dos aquários foram monitorados durante todos os ensaios. Para análise nutricional, ostras foram submetidas a bioacumulação com os produtos naturais por 24 horas e posteriormente foi analisado umidade, cinzas, gordura e proteína, teor de polifenóis totais e atividade antioxidante. Os resultados para a distribuição de MNV e bacteriófagos mostraram maior concentração de colifagos somáticos em MT e em BR de fagos F-específicos. As partículas infecciosas de MNV-1 apresentaram maiores contagens no TD. A bioacumulação com MNV-1 e bactérias usando o processo de depuração associado a Curcuma longa e Planktochlorella nurekis, apontou para redução viral de 1 log10 até 2log10 no TD das ostras. Após as 24 horas de bioacumulação com os produtos naturais, as ostras Crassostrea gigas apresentaram melhora nutricional significativa em sua composição centesimal, no teor de polifenóis e atividade antioxidante. Com os resultados obtidos, pode-se afirmar que Curcuma longa e Planktochlorella nurekis, de forma geral apresentaram benefícios antivirais e antibacterianos não apresentando toxicidade para as ostras. E ainda, valorizando as ostras comercialmente e nutricionalmente.

Abstract: The objective of this research was to study the tissue distribution of viral contaminants and disinfection performance and nutritional valuation of Crassostrea gigas oysters, mediated by the purification process associated with natural products. To evaluate the viral distribution of murine norovirus (MNV-1) and bacteriophages (somatic and F-specific coliphages), oysters were placed in an aquarium with natural seawater and 5x10³ Plaque Forming Unit (PFU) of somatic coliphages and F -specific and 7x109 PFU of MNV-1. For each test, three oysters were collected from each aquarium at 0, 4, 6 and 24 hours after the addition of bacteriophages and MNV-1. The oysters had their mantle (MT), gills (GL) and digestive tissue (DT) dissected. For the phage distribution test, samples were eluted in TPB (Tryptose Phosphate Buffer), and phages were quantified on tissues using the double agar technique. For MNV-1, each pool was subjected to viral concentration by polyethylene glycol 6000 (PEG 6000). The distribution of MNV-1 in MT, GL and DT was measured by plaque lysis assay (PFU of infectious viruses) and gene copies (GC) by RT-qPCR. For the evaluation of inactivation of norovirus (NoV) and bacteria by Curcuma longa and Planktochlorella nurekis in live Crassostrea gigas oysters. Oysters were bioaccumulated with MNV-1 and Escherichia coli and submitted to the purification process, associated with Curcuma longa and Planktochlorella nurekis. Each sample (pool of three oysters) had their digestive tissues (DT) dissected. Samples were subjected to MNV-1 concentration using polyethylene glycol 6000. Viral quantification was performed by Lysis Plate (PFU) and RT-qPCR (GC), respectively. For the quantification of bacteria, 100 µL aliquots at dilutions 10-2 and 10-4 were inoculated onto a plate with LB medium and a plate with Maconkey medium and after 48 hours the colonies were counted. The physical-chemical parameters of the aquarium water were monitored during all tests. For nutritional analysis, oysters were subjected to bioaccumulation with natural products for 24 hours and then moisture, ash, fat and protein, total polyphenol content and antioxidant activity were analyzed. The results for the distribution of MNV and bacteriophages showed higher concentration of somatic coliphages in MT and in GL of F-specific phages. Infectious MNV-1 particles had higher counts in DT. Bioaccumulation with MNV-1 and bacteria using the purification process associated with Curcuma longa and Planktochlorella nurekis, pointed to a viral reduction of 1 log10 to 2log10 in the DT of oysters. After 24 hours of bioaccumulation with natural products, Crassostrea gigas oysters showed significant nutritional improvement in their proximate composition, polyphenol content and antioxidant activity. With the results obtained, it can be affirmed that Curcuma longa and Planktochlorella nurekis, in general, presented antiviral and antibacterial benefits, not showing toxicity to oysters. And yet, valuing oysters commercially and nutritionally.