Avaliação do potencial antimicrobiao da lisozima pura ou associada a uma solução alcalina em um modelo de biofilme endodôntico multiespécie

Abstract

Microrganismos organizados em biofilmes podem ser cerca de mil vezes mais resistentes contra agentes antibacterianos. A lisozima possui grande potencial para ser utilizada na Odontologia, visto suas propriedades anti-inflamatórias, antivirais, antissépticas, anti-histamínicas e antineoplásicas. Este trabalho teve como objetivo avaliar in vitro o potencial antimicrobiano da lisozima em um modelo de biofilme endodôntico multiespécie de dez espécies. Foram utilizados 36 blocos de dentina bovina. O biofilme endodôntico composto por Actinomyces oris, Enterococcus faecalis, Fusobacterium nucleatum, Parvimonas micra, Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Selenomonas sputigena, Streptococcus oralis, Tannerella forsythia e Veillonella dispar, foi formado nos espécimes inseridos em placas de 24 poços. Após a incubação do biofilme por 21 dias, os espécimes foram divididos em 4 grupos (n=9): Controle, pH Alcalino (pH da solução = 12,5), Lisozima, pH Alcalino + Lisozima. Após, as respectivas soluções de cada grupo foram depositadas no interior dos poços sob os espécimes de dentina com biofilmes e incubadas por 24 horas em anaerobiose a 37ºC. O plaqueamento das diluições 10-4 e 10-5 de cada espécime foi realizado. As placas foram incubadas durante 5 dias em condições anáerobias a 37ºC para contagem das Unidades Formadoras de Colônias (UFC). Os dados das contagens de UFC foram transformados em log, e as diferenças entre os grupos de tratamento foram testadas pela ANOVA e teste de Tukey através do software IBM SPSS. O grupo Lisozima com pH Alcalino apresentou diferença estatística ao ser comparado com todos os outros grupos: Controle (p= 0,009), pH Alcalino (p=0,001) e Lisozima (p=0,002). Os demais grupos não apresentaram diferença estatística. O grupo pH Alcalino + Lisozima apresentou maior potencial antimicrobiano em relação ao biofilme (média do grupo = 5,4 log10 UFC/mL). Concluimos que a lisozima demonstrou eficácia antimicrobiana quando analisada in vitro em um modelo de biofilme endodôntico multiespécie.

Abstract: Microorganisms organized in biofilms can be about a thousand times more resistant against antibacterial agents. Lysozyme has great potential to be used as a substance, given its antiinflammatory, antiviral, antiseptic, antihistamine and antineoplastic properties. This work aims to evaluate in vitro the antimicrobial potential of lysozyme in a multispecies endodontic biofilm model of ten species. 36 blocks of bovine dentin were used. Afterwards, the endodontic biofilm composed of Actinomyces oris, Enterococcus faecalis, Fusobacterium nucleatum, Parvimonas micra, Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Selenomonas sputigena, Streptococcus oralis, Tannerella forsythia and Veillonella dispar, was formed in the specimens inserted in 24-well plates. After incubating the biofilm for 21 days, the specimens were divided into 4 groups (n=9): Control, Alkaline pH, Lysozyme, Alkaline pH + Lysozyme. Afterwards, the respective solutions of each group were deposited inside the wells under the dentin specimens with biofilms and incubated for 24 hours in anaerobiosis at 37ºC. Plating of 10-4 and 10-5 dilutions of each specimen was performed. Plates were incubated for 5 days in anaerobic conditions at 37°C for Colony Forming Units (UFC) counts. UFC counts data were log-transformed, and differences between treatment groups were tested by ANOVA and Tukey's test using IBM SPSS software. The Lysozyme with Alkaline pH group showed statistical difference when compared with all other groups: Control (p= 0.009), Alkaline pH (p=0.001) and Lysozyme (p=0.002). The other groups showed no statistical difference. The Alkaline pH + Lysozyme group had the highest antimicrobial potential compared to the biofilm (group mean = 5.4 log10 UFC/mL). Lysozyme demonstrated antimicrobial efficacy when analyzed in vitro in a multispecies endodontic biofilm model.