Análise sanguínea e intratumoral de neutrófilos e linfócitos T citotóxicos e características histopatológicas associadas ao prognóstico de pacientes com carcinoma epidermoide de boca

Abstract

O objetivo do presente estudo foi de avaliar a influência da razão entre neutrófilos e linfócitos (RNL) sanguínea e tumoral e de outras características histopatológicas sobre o tempo de sobrevida de pacientes com carcinoma epidermoide de boca (CEB). A amostra foi constituída por 46 pacientes, dos quais obteve-se amostras teciduais provenientes de biópsias incisionais (32,6%) e ressecções cirúrgicas (67,4%). Realizou-se imuno-histoquímica para a detecção de neutrófilos (CD66b) e linfócitos T citotóxicos (CD8), com posterior contagem das células positivas por mm2, separadamente no parênquima e estroma, e no centro e fronte de invasão tumoral. Calculou-se a RNL sanguínea e intratumoral dividindo-se o número de neutrófilos pelo número de linfócitos. Também foi realizada a análise histológica dos casos com relação a intensidade de brotamentos tumoral, profundidade de invasão, espessura tumoral, invasão perineural e linfovascular, padrão de invasão e proporção parênquima/estroma tumoral. Posteriormente foi avaliada a relação das variáveis histopatológicas com as características clínicas e com o tempo de sobrevida geral e livre de doença dos pacientes. O tempo de acompanhamento médio dos pacientes foi de 29,52 meses (desvio padrão: 25,43 meses), quatro pacientes vieram a óbito (8,69%) e trinta e dois pacientes apresentam recorrência local (69,56%). A mediana da RNL sanguínea foi 2,5 e tumoral foi 0,09, não sendo observada correlação entre ambas. Considerando-se o total de casos, observou-se redução do tempo de sobrevida geral em tumores com baixa infiltração de células CD8 no parênquima do centro tumoral. Houve redução do tempo de vida livre de doença em pacientes com RNL sanguínea abaixo de 1,72. Nas amostras de ressecções cirúrgicas, observou-se redução do tempo de sobrevida livre de doença em tumores com RLN intratumoral acima de 0,16 e em tumores com alta infiltração de CD66b no centro tumoral. Nessa amostra ainda, observou-se que a infiltração de células CD66b+ na fronte de invasão foi maior em tumores com padrão de invasão não-coeso em relação ao padrão coeso; além de alto grau de brotamento tumoral em tumores com invasão perineural e linfovascular, assim como associação entre a presença de invasão perineural e padrão de invasão não-coeso ou disperso. Finalmente, ao comparar características histopatológicas analisadas em biópsias incisionais e ressecções pareadas, observou-se que o número de brotamentos tumorais, a espessura tumoral e a proporção parênquima-estroma foram frequentemente subestimados em biópsias, e que a análise de concordância entre os tipos de amostra foi baixa. No presente estudo, observou-se associação entre a RNL tumoral e a piora do prognóstico, sugerindo a superioridade da análise local da resposta imunológica em relação à análise sanguínea. Além disso, a falta de correlação entre RNL sanguínea e tumoral sugerem que fatores tumorais são mais determinantes para a composição imunológica do tumor. Possivelmente, o impacto da RNL tumoral sobre o prognóstico foi devido à alta infiltração de neutrófilos pró-tumorais, uma vez que o aumento de neutrófilos no centro tumoral foi associado à redução do tempo de sobrevida. Já o aumento dessas células na fronte de invasão foi associado ao padrão de infiltração não-coeso. Ademais, a associação de brotamentos tumorais e o padrão de invasão com a presença de invasão perineural/linfovascular suportam o uso dessas variáveis como indicadores histopatológicos de fenótipo celular invasivo. Finalmente, o impacto das diferentes regiões tumorais sobre a infiltração de neutrófilos e linfócitos e sua associação com a sobrevida reforçam a importância da análise qualitativa, e não apenas quantitativa, da resposta imunológica tumoral.

Abstract: The aim of the present study was to evaluate the influence of blood and tumor neutrophil-lymphocyte ratio (NLR) and other histopathological characteristics on the survival time of patients with oral squamous cell carcinoma (OSCC). The sample consisted of 46 patients, from whom tissue samples were obtained from incisional biopsies (32.6%) and surgical resections (67.4%). Immunohistochemistry was performed for the detection of neutrophils (CD66b) and cytotoxic T lymphocytes (CD8), with subsequent counting of positive cells per mm2, separately in the parenchyma and stroma, and in the center and invasive front of the tumor. Blood and intratumoral NLR were calculated by dividing the number of neutrophils by the number of lymphocytes. Histological analysis of the cases was also carried out regarding the intensity of tumor buds, depth of invasion, tumor thickness, perineural and lymphovascular invasion, invasion pattern and tumor parenchyma/stroma ratio. Subsequently, the relationship of histopathological variables with clinical characteristics and with the overall survival (OS) and disease-free survival (DFS) time of the patients was evaluated. The mean follow-up time of patients was 29,52 months (standard deviation: 25,43 months), four patients died (8,69%) and thirty-two patients had local recurrence (69,56%). The median of blood NLR was 2,5 and tumor was 0,09, with no correlation between both. Considering the total number of cases, a reduction in OS time was observed in tumors with low infiltration of CD8 cells in the parenchyma of the tumor center. There was a reduction in DFS in patients with blood NLR below 1,72. In surgical resections, a reduction in DFS time was observed in tumors with intratumoral RLN above 0,16 and in tumors with high CD66b infiltration in the tumor center. In this sample, it was also observed that the infiltration of CD66b+ cells in the invasive front was greater in tumors with a non-cohesive invasion pattern in relation to the cohesive pattern; in addition to a high degree of tumor budding in tumors with perineural and lymphovascular invasion, as well as an association between the presence of perineural invasion and a non-cohesive or dispersed invasion pattern. Finally, when comparing histopathological characteristics analyzed in incisional biopsies and paired resections, it was observed that the number of tumor buds, tumor thickness and parenchyma-stroma ratio were often underestimated in biopsies, and that the analysis of agreement between sample types was low. In the present study, an association was observed between tumor NLR and worse prognosis, suggesting the superiority of local analysis of the immune response in relation to blood analysis. Furthermore, the lack of correlation between blood and tumor NLR suggest that tumor factors are more determinant for tumor immune composition. Possibly, the impact of tumor NLR on prognosis was due to the high infiltration of pro-tumor neutrophils since the increase in neutrophils in the tumor center was associated with reduced survival time. Moreover, the increase of these cells in the invasive front was associated with the non-cohesive infiltration pattern. Furthermore, the association of tumor buds and the invasion pattern with the presence of perineural/lymphovascular invasion support the use of these variables as histopathological indicators of invasive cell phenotype. Finally, the impact of different tumor regions on neutrophil and lymphocyte infiltration and its association with survival reinforce the importance of qualitative, and not just quantitative, analysis of the tumor immune response.