Desenvolvimento de método por eletroforese capilar empregando o modo de cromatografia eletrocinética micelar para determinação de cortisol em fluídos biológicos e medicamentos.

Abstract

O presente projeto de pesquisa propôs um método para determinação de cortisol em amostras de fluídos biológicos e de medicamentos empregando Cromatografia Eletrocinética Capilar Micelar (MEKC, do inglês “Micellar Electrokinetic Chromatography”). Também foi explorado o modo sweeping de pré-concentração online do cortisol. As condições experimentais otimizadas do método envolveram um capilar de sílica fundida de 48 cm de comprimento (50 µm de diâmetro interno) e detecção direta do cortisol no comprimento de onda de 250 nm. As injeções foram no modo hidrodinâmico 50 mbar durante 28 segundos e a tensão de separação aplicada foi de 25 kV. O eletrólito de corrida otimizado foi composto de tris hidroximetil aminometano 10 mmol L-1 e desoxicolato de sódio 70 mmol L-1. Os parâmetros de validação avaliados segundo a International Conference of Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals (ICH) revelaram que o método apresentou boa linearidade (0,10 – 50 mg L-1, com R2 >0,99), baixos valores de limites de detecção e quantificação (LOD = 0,06 mg L-1e LOQ = 0,18 mg L-1) e valores de precisão adequados (Coeficientes de Variação < 5%, para área de sinal). Por fim, o método foi aplicado em amostras de urina, saliva e medicamento comercial. Os limites para a determinação do cortisol ficaram baixos, mas ainda podem ser melhorados com mais estudos acerca da estratégia de pré-concentração online possível de ser aplicada em MECK, a qual se provou fundamental para o sucesso do projeto. O método apresentou potencial para controle de qualidade de medicamentos conferindo características como baixo consumo de reagentes e alta frequencia analítica, os quais estão em consonância com os princípios da Química Analítica Verde.