Padronização de ensaios de adesão e eficácia antibiofilme de antifúngicos e clorexidina frente a organismos relacionados à ceratite infecciosa grave

Abstract

Ceratites infecciosas graves estão entre as principais causas de transplantes de córnea e perda de visão, ocasionadas por microrganismos como o protozoário do gênero Acanthamoeba e leveduras como Candida spp. O tratamento dessas infecções é desafiador, especialmente nos casos de ceratite polimicrobiana, nos quais múltiplos microrganismos, incluindo protozoários e fungos, estão envolvidos simultaneamente. Tanto Acanthamoeba spp. quanto as espécies de Candida podem aderir às lentes de contato e à córnea do paciente, levando à formação de biofilmes polimicrobianos. No entanto, estudos sobre o potencial de adesão de Acanthamoeba spp. são escassos. Assim, o objetivo deste estudo foi padronizar metodologias para avaliar a adesão e formação de biofilmes entre Acanthamoeba spp. e Candida albicans, além de analisar a eficácia antibiofilme da natamicina, do voriconazol e da clorexidina contra esses microrganismos. A capacidade de adesão foi avaliada utilizando o corante cristal violeta, enquanto a suscetibilidade aos fármacos foi determinada com o uso do corante Tripan Blue. Os resultados mostraram que tanto a cepa de A. castellanii quanto o isolado clínico R40 apresentaram alta capacidade de adesão. Todos os tratamentos testados demonstraram atividade antibiofilme promissora e foram eficazes na erradicação de biofilmes de C. albicans e Acanthamoeba spp. A natamicina se destacou na redução de biofilmes de C. albicans, tanto isoladamente quanto em co-cultura com Acanthamoeba spp., enquanto a clorexidina mostrouse altamente eficaz na erradicação de biofilme de Acanthamoeba spp. Portanto, um melhor entendimento do comportamento de adesão de Acanthamoeba spp., isoladamente ou em associação com espécies de Candida, e a avaliação da eficácia antibiofilme dos tratamentos podem contribuir para um manejo mais eficaz da ceratite polimicrobiana grave, como também a avaliação da eficácia de soluções multipropósitos para a higienização e manutenção das lentes de contato e estojos.

Severe infectious keratitis is among the leading causes of corneal transplants and vision loss, caused by microorganisms such as the protozoan genus Acanthamoeba spp. and yeasts Candida spp. Treating these infections is challenging, especially in cases of polymicrobial keratitis, in which multiple microorganisms, including protozoa and fungi, are involved simultaneously. Both Acanthamoeba spp. and Candida species can adhere to contact lenses and the patients cornea, leading to the formation of polymicrobial biofilms. However, studies on the adhesion potential of Acanthamoeba spp. are scarce. Therefore, this study aimed to standardize methodologies to evaluate adhesion and biofilm formation between Acanthamoeba spp. and Candida albicans, as well as to analyze the antibiofilm efficacy of natamycin, voriconazole, and chlorhexidine against these microorganisms. Adhesion capacity was assessed using crystal violet dye, while drug susceptibility was determined using Trypan Blue dye. The results showed that the strain A. castellanii and the clinical isolate R40 exhibited high adhesion capacity. All treatments tested demonstrated promising antibiofilm activity and were effective in eradicating biofilms of C. albicans and Acanthamoeba spp. Natamycin stood out in reducing biofilms of C. albicans, both alone and in co-culture with Acanthamoeba spp., while chlorhexidine proved highly effective in eradicating Acanthamoeba spp. biofilms. Therefore, a better understanding of the adhesion behavior of Acanthamoeba spp., either alone or in association with Candida species, and the evaluation of the antibiofilm efficacy of treatments could contribute to more effective management of severe polymicrobial keratitis, as well as the assessment of the efficacy of multipurpose solutions for cleaning and maintaining contact lenses and cases.