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Abstract:
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Diante da recente implementação da Rede Nacional de Laboratórios de Biologia Molecular para Detecção de Clamídia e Gonococo no SUS, estabelecida pela Nota Técnica Nº 26/2023, o LBMMS/CCS/UFSC, em parceria com o DATHI/SVSA/MS, inaugurou no segundo semestre de 2023 a primeira rodada de Avaliação Externa da Qualidade da Rede Nacional de Biologia Molecular para Detecção de Chlamydia trachomatis e Neisseria gonorrhoeae (AEQ-CT/NG). Nesse contexto, o objetivo geral desta pesquisa foi padronizar a carga bacteriana mínima e máxima para elaboração de painéis liofilizados para avaliação externa da qualidade de Neisseria gonorrhoeae (NG). Para isso, foi realizado o cultivo da cepa ATCC 49226 de NG em Ágar Thayer Martin e subcultivo em Ágar Chocolate. A partir do isolado bacteriano, foi produzida uma suspensão 0,5 McF, que foi submetida ao processo de diluição seriada para produção de alíquotas com concentrações na faixa de 10^-3 a 10^-10, totalizando 96 criotubos amostrais. Desses, 48 foram reservados para análise direta por PCR e 48 foram liofilizados antes de serem submetidos ao processo analítico, de forma a determinar a perda de carga bacteriana pelo processo de liofilização. A PCR foi realizada em três diferentes equipamentos: Bio-Rad CFX96™, Cepheid® GeneXpert® e Roche® Cobas® 5800. Além disso, a fim de avaliar o potencial de contaminação cruzada da técnica de diluição seriada e de liofilização, foram produzidos, respectivamente, ''brancos de bancada'' e ''brancos de liofilização'', igualmente submetidos ao processo de análise por PCR nos três diferentes equipamentos. Após a coleta dos dados da pesquisa, estabeleceu-se que a faixa de diluição detectável para uma suspensão bacteriana de NG 0,5 McF foi de 10^-3 a 10^-7, tanto para amostras não-liofilizadas quanto liofilizadas. Dentro deste intervalo, determinou-se com sucesso a dinâmica entre pontos de diluição mínimo e máximo a partir das equações das curvas logarítmicas Ct versus diluição, que forneceram valores satisfatórios de R². Também foi possível determinar a variação da carga bacteriana das amostras após a liofilização, para a qual constatou-se que tal processo não interfere no status de detecção amostral. Além disso, por meio de testes de contaminação cruzada em bancada e liofilizador, notou-se que o processo de liofilização não gerou resultados falsos-positivos em nenhuma das condições testadas. Por fim, concluiu-se que a faixa ideal de diluições bacterianas para compor painéis de AEQ com Cts baixos, intermediários e altos foi de 10^-3 a 10^-7. |
