Análise de parâmetros relacionados à disfunção mitocondrial e autofagia em uma linhagem de células de glioma exposta ao excesso de cobre

Abstract

O cobre (Cu) é um metal essencial que atua como cofator de diversas enzimas, sendo crucial para o metabolismo energético e a sinalização celular. No entanto, o excesso de cobre pode ser tóxico, gerando estresse oxidativo, inibindo enzimas antioxidantes e comprometendo a função mitocondrial. Ainda, estudos demonstram que o excesso de cobre pode ativar a autofagia. Desta forma, o presente trabalho teve o objetivo de analisar parâmetros relacionados à disfunção mitocondrial e autofagia em linhagem de células C6 (glioma de rato) expostas ao excesso de cobre por 24h e/ou 48h. As células C6 foram expostas a diferentes concentrações de CuSO 4 (0-1200 µM) durante 24 ou 48h. Após, foram avaliados a viabilidade celular, pelos ensaios de MTT e vermelho neutro; a atividade dos complexos I e II da cadeia respiratória, por métodos espectrofotométricos; o potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm), utilizando a sonda JC1; e o conteúdo de proteínas relacionadas à autofagia e mitofagia, por imunofluorescência. Os resultados demonstraram que o CuSO₄ reduziu a viabilidade celular e o ΔΨm, e que a atividade do Complexo II foi inibida, além de resultar em um aumento da imunomarcação para PINK1 e LC3B. Assim, conclui-se que a queda do ΔΨm pode estar associada à disfunção do Complexo II pois, apesar deste complexo não contribuir diretamente com a formação do ΔΨm, ele fornece elétrons para os complexos III e IV, indicando comprometimento da integridade mitocondrial frente ao estresse induzido pelo cobre. Desta forma, o excesso de cobre desencadeia a indução da mitofagia/autofagia nas células C6, para a remoção de organelas disfuncionais, como verificado através da imunomarcação para PINK1 e LC3B. Contudo, não foram observadas alteração no conteúdo de ATG16L, sugerindo que a etapa inicial da formação de autofagossomos pode estar comprometida. Esses resultados reforçam a toxicidade mitocondrial do cobre e sua relação com a diminuição da viabilidade celular, provavelmente devido à indução de processos de morte celular.