Desenvolvimento e validação de um teste de ELISA baseado na proteína recombinante Mb1454 de Mycobacterium bovis para diagnóstico sorológico da tuberculose bovina e investigação da resposta imune em bovinos coinfectados pelo vírus da leucose bovina (BLV)

Abstract

A tuberculose bovina (bTB) é uma doença infecciosa de natureza zoonótica que persiste apesar dos esforços para seu controle e erradicação. A ausência de métodos diagnósticos que detectem eficientemente o M. bovis contribui significativamente para esse cenário. Em regiões com alta prevalência de bTB, coinfecções com o vírus da leucose bovina (BLV) podem alterar a resposta imune adaptativa, dificultando o diagnóstico preciso da bTB. Neste trabalho foi desenvolvido um novo teste de ELISA baseado na proteína recombinante Mb1454, com vistas a facilitar a detecção da bTB, oferecendo resultados mais rápidos, precisos e acessíveis. A análise do ELISA-Mb1454 utilizando amostras de soro de bovinos infectados (positivos em três critérios diagnósticos: teste de tuberculinização cervical comparativo (SICTT), presença de lesões macroscópicas compatíveis com bTB e isolamento de M. bovis por cultura bacteriana; n = 113) e bovinos não infectados (negativos para SICTT, lesões macroscópicas e cultura M. bovis; n = 120) apresentou sensibilidade de 92,9% e especificidade de 90,0%, com acurácia de teste de 91,3%, indicando alta capacidade de discriminação entre amostras positivas e negativas para o M. bovis (p < 0,0001). Apoiando essa hipótese, foi investigado se a coinfecção pelo vírus da leucose bovina (BLV), um dos principais patógenos bovinos, influencia na sensibilidade dos testes imunológicos para bTB. Os resultados demonstraram que bovinos infectados por BLV com linfocitose persistente (BLV/LP), quando expostos a antígenos micobacterianos, apresentam resposta reduzida de hipersensibilidade do tipo retardada (DTH) ao PPD-M. bovis (p<0,05) e teste ELISA (p<0,05), o que pode prejudicar programas de controle e erradicação da bTB.

Abstract: Bovine tuberculosis (BTB) is a zoonotic infectious disease that persists despite efforts to control and eradicate it. The lack of diagnostic methods that efficiently detect M. bovis contributes significantly to this situation. In regions with a high prevalence of bTB, coinfections with bovine leukosis virus (BLV) can alter the adaptive immune response, hindering accurate bTB diagnosis. In this study, a new ELISA test based on the recombinant protein Mb1454 was developed to facilitate bTB detection, offering faster, more accurate, and accessible results. ELISA-Mb1454 analysis using serum samples from infected cattle (positive in three diagnostic criteria: comparative cervical tuberculin skin test (SICTT), presence of macroscopic lesions compatible with bTB, and isolation of M. bovis by bacterial culture; n = 113) and uninfected cattle (negative for SICTT, macroscopic lesions, and M. bovis culture; n = 120) showed a sensitivity of 92.9% and a specificity of 90.0%, with a test accuracy of 91.3%, indicating a high capacity to discriminate between samples positive and negative for M. bovis (p < 0.0001). Supporting this hypothesis, we investigated whether coinfection with bovine leukosis virus (BLV), a major bovine pathogen, influences the sensitivity of immunological tests for bTB. The results showed that cattle infected with BLV with persistent lymphocytosis (BLV/LP), when exposed to mycobacterial antigens, presented a reduced delayed-type hypersensitivity (DTH) response to PPD-M. bovis (p<0.05) and ELISA test (p<0.05), which may impair TB control and eradication programs.