Bactérias promotoras do crescimento vegetal usadas como inoculantes
Author:
Gnecco, Nicolle
Abstract:
Bactérias promotoras de crescimento vegetal (BPCV) são bactérias
benéficas com potencial para uso em inoculantes. Para que o inoculante tenha
sucesso, é necessário que as células estejam viáveis, com suas membranas e
funções metabólicas intactas, e com número adequado de células para uma
efetiva colonização. A técnica da PCR quantitativa (qPCR), usada para
quantificar as amostras, não é capaz de discriminar células viáveis de inviáveis.
Uma alternativa a isso é usar um pré-tratamento nas amostras com corantes
intercalantes de DNA, como a monoazida de propídio (PMA), capazes de fazer
essa distinção. O presente estudo teve como principal objetivo determinar as
condições ótimas para obtenção de células inviáveis da espécie Herbaspirillum
seropedicae por tratamento térmico para utilização em ensaio de PMA-qPCR.
Foram testadas 3 temperaturas: 38°C, 45°C e 52°C, durante tempos entre 0 e
180 minutos. Para os ensaios, foram utilizadas bactérias de uma cultura pura de
H. seropedicae da cepa SmR1, cultivada em meio de cultura NFbHP malato. Em
cada tempo foram usados 3 microtubos com 1mL de cultura pura. Os tubos foram
submersos a temperatura constante de 38°C, 45°C ou 52°C em banho
termoestatizado, durante os tempos estipulados. Após a retirada, realizou-se
diluição seriada a partir de 1 mL de cultura nos tubos em 0,9% de solução salina,para posterior plaqueamento em meio seletivo. Avaliou-se o efeito das
temperaturas nas células pela contagem do crescimento das colônias
plaqueadas, após incubação por 48h em estufa a 30°C. Concluiu-se que a
temperatura de 38°C não causou mudanças drásticas na viabilidade celular, a
de 45°C causou leve redução das colônias, e a de 52°C causou uma diminuição
gradual e significativa do número de células viáveis, definindo esta como a
temperatura na qual a viabilidade celular foi efetivamente comprometida. Sendo
assim, a temperatura de 52°C foi considerada a mais adequada para obtenção
de células inviáveis, necessárias para estudos posteriores.
