Bactérias promotoras do crescimento vegetal usadas como inoculantes

Abstract

Bactérias promotoras de crescimento vegetal (BPCV) são bactérias benéficas com potencial para uso em inoculantes. Para que o inoculante tenha sucesso, é necessário que as células estejam viáveis, com suas membranas e funções metabólicas intactas, e com número adequado de células para uma efetiva colonização. A técnica da PCR quantitativa (qPCR), usada para quantificar as amostras, não é capaz de discriminar células viáveis de inviáveis. Uma alternativa a isso é usar um pré-tratamento nas amostras com corantes intercalantes de DNA, como a monoazida de propídio (PMA), capazes de fazer essa distinção. O presente estudo teve como principal objetivo determinar as condições ótimas para obtenção de células inviáveis da espécie Herbaspirillum seropedicae por tratamento térmico para utilização em ensaio de PMA-qPCR. Foram testadas 3 temperaturas: 38°C, 45°C e 52°C, durante tempos entre 0 e 180 minutos. Para os ensaios, foram utilizadas bactérias de uma cultura pura de H. seropedicae da cepa SmR1, cultivada em meio de cultura NFbHP malato. Em cada tempo foram usados 3 microtubos com 1mL de cultura pura. Os tubos foram submersos a temperatura constante de 38°C, 45°C ou 52°C em banho termoestatizado, durante os tempos estipulados. Após a retirada, realizou-se diluição seriada a partir de 1 mL de cultura nos tubos em 0,9% de solução salina,para posterior plaqueamento em meio seletivo. Avaliou-se o efeito das temperaturas nas células pela contagem do crescimento das colônias plaqueadas, após incubação por 48h em estufa a 30°C. Concluiu-se que a temperatura de 38°C não causou mudanças drásticas na viabilidade celular, a de 45°C causou leve redução das colônias, e a de 52°C causou uma diminuição gradual e significativa do número de células viáveis, definindo esta como a temperatura na qual a viabilidade celular foi efetivamente comprometida. Sendo assim, a temperatura de 52°C foi considerada a mais adequada para obtenção de células inviáveis, necessárias para estudos posteriores.