Aplicação do método da Reação em Cadeia da Polimerase quantitativa (qPCR) na identificação de Weissella viridescens

Abstract

As Bactérias Ácido Lácticas (BAL) são um grupo microbiano deteriorante de produtos cárneos embalados a vácuo que podem causar o inchaço da embalagem e aparecimento de limo, dentre elas Weissella viridescens pode causar o esverdeamento na superfície do produto. Este trabalho tem como objetivo principal utilizar o método de quantitative PCR (qPCR) para identificação de Weissella viridescens em cultura pura. Ao longo desse trabalho foi desenvolvida uma metodologia para a identificação do DNA isolado de W. viridescens. Diluições seriadas do DNA foram utilizadas para amplificação por SYBR® Green qPCR e construção da curva padrão, correlacionando os valores de Ciclo threshold (Ct) versus log UFC/mL obtidos por contagem em placas. A curva padrão foi gerada com eficiência (E) de 1,12 e R2 de 0,9979. O limite de detecção (LD) correspondeu a 3,7 log UFC/mL de W. viridescens, o que corresponde a 32,5 fg de DNA e um Ct de 26,75 ± 0,5. A especificidade da reação utilizando o corante de SYBR® Green I foi comprovada pela curva de melting, através da geração de apenas um pico de temperatura de melting (Tm) com o valor de 81,4 ± 0,08 °C. Assim, foi possível identificar W. viridescens em meio de cultivo na condição isotérmica de 30 °C utilizando o método de SYBR® Green qPCR. Espera-se, com este estudo, a definição das melhores condições para quantificação da biomassa de W. viridescens, em meio de cultura. Estes resultados servirão de base para estudos futuros do grupo de microbiologia preditiva, para identificação e quantificação de W. viridescens em produtos cárneos.